[發(fā)明專利]一株分泌甲硝唑單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210530405.0
• 申請(qǐng)日: 2022-05-16
• 公開（公告）號(hào): CN114774367B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胥傳來(lái);雷咸祿;匡華;徐麗廣;馬偉;劉麗強(qiáng);宋珊珊;胡擁明;胥欣欣;郭玲玲;倪萍;畢雪威;郭鵬飛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué);無(wú)錫杰圣杰康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/577;C07K14/765;C07K14/77;C07D233/92
• 代理公司: 蘇州市中南偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32257
• 代理人: 王玉仙

本發(fā)明提供了一株分泌甲硝唑單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，本發(fā)明的雜交瘤細(xì)胞株，已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏日期2021年05月13日，保藏編號(hào)CGMCCNo.22330。本發(fā)明所述免疫抗原制備的單克隆抗體靈敏度高，以MNZ?GA耦合載體蛋白制備的完全抗原為包被抗原，抗體在ic?Elisa中的IC50值為0.075ng/mL。本發(fā)明所提供的甲硝唑半抗原，以及所述甲硝唑抗原在抗體制備和甲硝唑藥物殘留分析檢測(cè)應(yīng)用方面具有十分重要的意義和重大價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是指一株分泌甲硝唑單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

甲硝唑作為一種抗生素和抗原蟲劑，對(duì)治療或預(yù)防厭氧菌引起的系統(tǒng)或局部感染效果顯著，抗菌譜包括脆弱擬桿菌和其他擬桿菌屬，梭形桿菌、產(chǎn)氣梭狀芽孢桿菌、真桿菌、韋容球菌、消化球菌和消化鏈球菌等，對(duì)組織滴蟲、毛滴蟲、均有殺滅作用，對(duì)球蟲也有一定的抑制作用。由于甲硝唑?qū)捬蹙呐R床效果顯著，其也被廣泛用于畜禽水產(chǎn)養(yǎng)殖中疾病的治療，但不當(dāng)?shù)氖褂靡约盀E用會(huì)導(dǎo)致其在動(dòng)物體內(nèi)大量殘留，從而危害人體健康。我國(guó)對(duì)動(dòng)物性食品中甲硝唑的藥物殘留做出了不得檢出的嚴(yán)格的限定。因此，建立快速、有效、高靈敏的檢測(cè)甲硝唑含量的方法具有重要意義及市場(chǎng)價(jià)值。

目前，對(duì)于動(dòng)物性食品中甲硝唑的殘留監(jiān)測(cè)仍以儀器分析為主，包括液相色譜、氣相色譜和液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)等。盡管這些方法靈敏度和可靠性較高，但需要較高專業(yè)性、復(fù)雜的前處理技術(shù)，且具有耗時(shí)長(zhǎng)和成本高的缺陷。近年來(lái)，隨著免疫分析技術(shù)的快速發(fā)展，建立一種高效、快速和高靈敏的免疫檢測(cè)方法對(duì)于動(dòng)物性食品中甲硝唑藥物殘留的檢測(cè)具有十分重要的意義。

影響免疫分析檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的根本要素時(shí)高靈敏度和高親和力抗體的制備，而制備性能優(yōu)異抗體的關(guān)鍵就是半抗原的設(shè)計(jì)和合成，以及完全抗原的構(gòu)建。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明在半抗原的設(shè)計(jì)過(guò)程中，以2-甲基位置為衍生位點(diǎn)，一方面，最大限度地保留了甲硝唑原有官能團(tuán)結(jié)構(gòu)，不引入其他雜原子，另一方面，通過(guò)碳鏈延長(zhǎng)能夠使其與載體蛋白耦合后最大限度地暴露自身官能團(tuán)結(jié)構(gòu)，從而增加免疫的特異性，對(duì)制備高靈敏度和高特異性的甲硝唑抗體具有十分重要的意義。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株分泌甲硝唑單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，分類命名為單克隆細(xì)胞株，保藏日期2021年05月13日，保藏編號(hào)CGMCC?No.22330。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種甲硝唑單克隆抗體，所述的甲硝唑單克隆抗體由保藏編號(hào)為CGMCC?No.22330的雜交瘤細(xì)胞株分泌得到。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述的雜交瘤細(xì)胞株或所述的甲硝唑單克隆抗體在檢測(cè)甲硝唑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種試劑盒，所述試劑盒中含有所述的雜交瘤細(xì)胞株或所述的甲硝唑單克隆抗體。

本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供所述試劑盒在檢測(cè)甲硝唑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第六個(gè)目的是提供一種甲硝唑半抗原，其結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明的第七個(gè)目的是提供所述的甲硝唑半抗原的制備方法，包括如下步驟：

(1)先稱取甲硝唑(MNZ，40g,233.9mmol)溶解到無(wú)水N,N-二甲基甲酰胺(DMF，400mL)中，然后向上述溶液中加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(DMF-DMA，400mL)和三氟乙酸(TFA，2mL)，在100℃和充氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下保持磁力攪拌反應(yīng)48h，反應(yīng)完成后，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得到黑色固體化合物1(37g,69.9％)；