[發明專利]一種細胞計數方法

在審

• 申請號: 202210521240.0
• 申請日: 2022-05-13
• 公開（公告）號: CN114923836A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 王連軍
• 申請（專利權）人: 王連軍
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10
• 代理公司: 慈溪夏遠創科知識產權代理事務所(普通合伙) 33286
• 代理人: 陳伯祥

本發明公開了一種細胞計數方法，涉及細胞計數相關技術領域，包括A：取樣管理、B：部署標本檢測管理、C：執行管理、D：分類管理、E：液體樣本濃度管理、F：不同溫度變化下樣本的流動性、G：針對待測液體流速不同的計數策略、H：得到并區分不同種類的細胞含量方法：包括檢測溫度、檢測樣本、檢測設備、檢測執行、核對數據和得出結果。本發明通過取出定量樣本在不同溫度下保存，保持細胞的活性不同，避免在對細胞計數時，細胞活性差在樣本內堆積，且采用電阻脈沖計數時，流速快易造成對細胞統計不到位，降低實際中的細胞數量，在樣本流動穿過微孔時，電極間的電阻發生瞬時變化，產生電脈沖，通過一個脈沖感應模塊對細胞的數量統計。

技術領域

本發明涉及細胞計數相關技術領域，特別涉及一種細胞計數方法。

背景技術

干細胞治療行業是新的產業熱點，目前常用的干細胞有造血干細胞和間充質干細胞兩種，其中造血干細胞屬于白細胞的一種，可以用血細胞計數儀來準確測量其濃度，而間充質干細胞是一種貼壁細胞，需要貼壁生產，呈梭狀，計數困難。

在中國發明專利申請號：CN201811552394.6中公開有一種基于骨架提取的細胞計數方法，該基于骨架提取的細胞計數方法，雖然，采用OTSU閾值分割、形態學操作對組織病理學圖像進行預處理，具有圖像分割效果好、計算量小、運行簡單、運行效率高等優點，利用細胞二值圖像的骨架化來對細胞進行計數，降低了組織病理學圖像中組織細胞高度粘連對細胞計數的影響，獲得的結果具有較好的準確性，方法具有較高的運行效率，但是，該基于骨架提取的細胞計數方法，需要人工操作稀釋，在計數池加樣，操作誤差較大，重現性很差，計數結果不穩定，影響在干細胞中治療使用。

因此，提出一種細胞計數方法來解決上述問題很有必要。

發明內容

（一）解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種細胞計數方法，解決了需要人工操作稀釋，在計數池加樣時操作誤差較大，重現性很差、計數結果不穩定，影響在干細胞中治療使用的問題。

（二）技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

一種細胞計數方法，包括以下步驟：

A：取樣管理：對病人造血機構內血液樣本，分割成多組體積相等的計數池；

B：部署標本檢測管理：在樣本體積和反應電壓大小一樣的情況下，對多組樣本檢測；

C：執行管理：在滿足樣本檢測條件的情況下執行技術，改變液體穿過流速，并得出計數結果；

D：分類管理：根據脈沖波的數量，脈沖幅度的大小，區分不同種類的細胞的數量；

E：液體樣本濃度管理：在對分類后的細胞統計，得出樣本計數池內細胞總數，細胞濃度=電脈沖細胞數量/樣本計數池體積。

F：不同溫度變化下樣本的流動性為：樣本在不同溫度下流動性不同，進而影響細胞的活性，檢測中出現較大的誤差值。

G：針對待測液體流速不同的計數策略為：微孔未設置阻斷，使樣本正常穿過微孔，測出一個電脈沖的總量為875；將微孔內阻斷一半，改變樣本穿過微孔的速度，測出一個電脈沖的總量為960；將微孔內阻斷三分之二，減小樣本穿過微孔的速度，測出一個電脈沖的總量為816。

H：得到并區分不同種類的細胞含量方法：包括檢測溫度、檢測樣本、檢測設備、檢測執行、核對數據和得出結果。

可選的，所述檢測溫度具體為：對樣本儲存時的溫度調控，分別將多個樣本的溫度設置為50°、35°和20°，確定溫度是否對細胞計數產生影響。

可選的，所述檢測樣本具體為：對于每個樣本，進行詳細觀察核對，確保其中沒有摻入變量物質。

可選的，所述檢測設備具體為：電源接通是否穩定，微孔內電脈沖是否正常，確保設備內部整潔，避免其他物質混入樣本，改變計數結果。