[發明專利]一種同時鑒定三個松花菜品種的方法及其使用的引物對

在審

• 申請號: 202210519283.5
• 申請日: 2022-05-13
• 公開（公告）號: CN114990248A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 丁云花;李麗
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

本發明公開了一種同時鑒定京松1號、京松2號和京松3號三個松花菜品種的方法及其使用的引物對。引物對由SEQIDNO:1所示的單鏈DNA分子和SEQIDNO:2所示的單鏈DNA分子組成。采用該引物對在幼苗期即可實現三個品種的真偽鑒定。相比傳統田間鑒定方法，本發明可以大大縮短時間，還可節省用地、用工、水肥等。本發明具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種同時鑒定三個松花菜品種的方法及其使用的引物對。

背景技術

品種鑒定是種子質量檢測工作中的一項重要內容，其主要目的是確定送驗樣品與所聲明的品種的符合程度。SSR分子標記技術是一門新興的技術，它是以個體間遺傳物質內核苷酸序列變異為基礎的遺傳標記技術，是 DNA水平遺傳多態性的直接反映。與其它遺傳標記技術相比，SSR分子標記技術具有信息豐富、檢測快速準確、易于標準化操作等特點，十分適合用來進行植物品種鑒定和分析。新的《種子法》中明確規定SSR分子標記的方法進行蔬菜品種真實性檢測結果可以作為偽劣種子判定的依據。

松花菜，是十字花科蕓苔屬甘藍種花椰菜的一個特殊變種，因為其花梗較長、花球較松，口感比傳統的緊實型花椰菜更脆、更好，深受消費者喜愛。我國松花菜的栽培面積近十多年隨著市場需求的快速增長而不斷擴大。相應地，育成和推廣的品種也越來越多，其中不乏異名同種的同質化品種，對知識產權的保護構成了嚴峻的挑戰。同時，品種的種子純度是影響種子質量的重要指標，直接影響產量和經濟效益。松花菜具有明顯的雜種優勢，生產用種子基本都是雜交種，種子生產主要有兩條途徑：自交不親和系和雄性不育系。自交不親和系途徑生產的種子，往往會由于親本的自交不親和性不夠徹底而產生少量的自交種子，種子采收時無法鑒別而混雜在雜交種中造成假雜種。雄性不育系途徑生產雜交種，雖然可以克服自交不親和系途徑造成的假雜種，但是種子生產時如果制種田空間隔離不夠、花期田間管理不當引起花粉污染，或者在種子采收、晾曬、加工、運輸等過程中出現機械混雜，都會直接影響種子純度。種子純度不合格，會給種子經營企業和種植戶造成巨大的經濟損失。因此，進行純度鑒定，保證種子質量是種子進入市場銷售之前必須做的工作。

純度鑒定傳統方法是利用幼苗或者株型等形態差異進行真假雜種的鑒別，松花菜生長周期長，利用傳統的形態學鑒定方法花費時間長、成本高，還容易受環境條件和基因顯隱性等因素的影響，使得鑒定結果的準確度降低。現代分子生物技術的快速發展，為復雜的多性狀在DNA水平進行早期、準確、高效地選擇提供了可能。利用分子標記技術進行種子純度的鑒定，具有快速、高效、易重復、不受環境影響等優勢。以 PCR技術為核心的SSR(Simplesequence repeat)分子標記，其位點特異性在基因組中廣泛、豐富、均勻地分布，具有共顯性、多態性高和重復性好的特點，被應用于植物的遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構建、分子標記輔助育種及品種鑒定中。雖然SSR分子標記已有應用于品種純度鑒定，但基本都是一個引物針對一個品種，鑒定多個品種需要開發多個引物，影響成本和效率。

發明內容

本發明的目的為鑒定京松1號、京松2號和京松3號三個品種，以保證松花菜品種的純度。

本發明首先保護一種鑒定京松1號、京松2號和京松3號三個品種中至少一種的方法，可包括如下步驟：以待測松花菜的基因組DNA為模板，采用引物對CH19-20 進行PCR擴增，檢測，然后進行如下判斷：

如果僅得到三種擴增片段且大小分別為264bp、286bp和310bp，則待測松花菜為京松1號；

如果僅得到三種擴增片段且大小分別為269bp、288bp和312bp，則待測松花菜為京松2號；

如果僅得到兩種擴增片段且大小分別為298bp和267bp，則待測松花菜為京松3號；

所述引物對CH19-20由上游引物和下游引物組成；

上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。