[發明專利]一種抑制二化螟幼蟲頭殼發育的干擾RNA、試劑盒及使用方法

在審

• 申請號: 202210517847.1
• 申請日: 2022-05-12
• 公開（公告）號: CN114854750A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 鄭洋;劉長鵬
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/87;C12N15/12;A01N43/90;A01P7/04
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 李翔

1.一種抑制二化螟幼蟲頭殼發育的干擾RNA，其特征在于，所述干擾RNA包括如SEQ IDNO.4所示的正義鏈序列和如SEQ ID NO.5所示的反義鏈序列。

2.根據權利要求1所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的干擾RNA，其特征在于，所述干擾RNA添加T7啟動子形成的靶向dsRNA包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列。

3.一種抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1或2所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的干擾RNA。

4.根據權利要求3所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括用于提升干擾RNA沉默靶標基因效率的陽離子樹枝狀高分子載體和穩定助劑。

5.根據權利要求4所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，所述陽離子樹枝狀高分子載體為聚酰胺型陽離子樹枝狀高分子載體，所述穩定助劑為二甲基亞砜。

6.根據權利要求3所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PBS緩沖液。

7.根據權利要求6所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，所述PBS緩沖液的濃度為0.02mol/L。

8.根據權利要求4所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，所述干擾RNA為凍干粉。

9.根據權利要求8所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒，其特征在于，一組試劑盒中，干擾RNA為200μg，陽離子樹枝狀高分子載體為330μg，穩定助劑為3-50μL。

10.根據權利要求3-9任一項所述抑制二化螟幼蟲頭殼發育的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、對干擾RNA離心，每200μg干擾RNA加入1mL PBS緩沖液以配制干擾RNA溶液；

步驟二、取330μg聚酰胺型陽離子樹枝狀高分子載體加入1mL PBS緩沖溶液配置載體溶液，并加入3-50μL穩定助劑，經加熱靜置、超聲分散后，獲得載體助劑溶液體系；

步驟三、將步驟一配制的干擾RNA溶液與步驟二配制的載體助劑溶液體系以體積比1:1-32混合，配成干擾RNA/載體助劑混合液作為干擾二化螟幼蟲頭殼發育的工作液；

步驟四、選取健康的二化螟幼蟲作為待干擾試蟲，于光照培養箱中培養3天；

步驟五、對二化螟幼蟲節間膜注射步驟三所述工作液，注射體積為每20mg體重注射1-1.5μL。