[發明專利]一種尿液檢測用新型高效液相-串聯質譜分析方法

在審

• 申請號: 202210517098.2
• 申請日: 2022-05-12
• 公開（公告）號: CN114910587A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 馬克;周玲;劉振華;程友飛;李瑞;章盛邦;邵小林
• 申請（專利權）人: 軍科正源（上海）生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種尿液檢測用新型高效液相-串聯質譜分析方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1吸附去除：

每毫升人尿液中添加0.1g活性炭，振蕩2小時，室溫4000g條件下離心10分鐘，取上層清液，用0.22μm濾膜過濾得到處理后的經活性炭吸附的尿液基質，作為替代基質用于配制標準曲線和質控樣品；

S2配置溶液：

1)含0.1％甲酸水溶液：取1000mL的超純水于1000mL試劑瓶中，加1.0ml甲酸，混合均勻；

2)含0.1％甲酸乙腈溶液：取1000mL的乙腈于1000mL試劑瓶中，加1.0ml甲酸，混合均勻；

3)含0.1％氨水的50％甲醇水溶液：取500mL甲醇、500mL超純水加入1000mL試劑瓶中，加入4.0mL氨水(28％～30％)，混合均勻；

4)含0.1％氨水的水溶液：取100mL超純水加入100mL試劑瓶中，加入0.40mL氨水(28％～30％)，混合均勻；

S3分析物儲備液的配制：

于透明玻璃瓶(鋁箔紙包裹)中，精密稱取尿酸、黃嘌呤、次黃嘌呤和肌酐對照標準物質，經校正因子折算后，加入適量含0.1％氨水的水溶液，配制成濃度均為0.500mg/mL的尿酸、黃嘌呤、次黃嘌呤和肌酐儲備液；

S4內標儲備液和工作溶液的配制：

于透明玻璃瓶(包裹鋁箔紙)中，精密稱取尿酸-1,3-15N2對照標準物質，經校正因子折算后，加入適量含0.1％氨水的水溶液，配制成濃度為0.500mg/mL尿酸內標儲備液；對于黃嘌呤-13C15N2和次黃嘌呤-13C2,15N對照標準物質(1mg/瓶)，經校正因子折算后，直接向棕色玻璃瓶中加入適量含0.1％氨水的水溶液，配制成濃度均為0.500mg/mL黃嘌呤內標儲備液和次黃嘌呤內標儲備液；精密稱取肌酐-d3對照標準物質，經校正因子折算后，加入適量含0.1％氨水的水溶液，配制成濃度為0.500mg/mL肌酐內標儲備液，于-10～-30°C冰箱中保存；

S5標準曲線樣品和質控樣品的配制:

尿酸標準曲線的濃度點為5.00，10.0，25.0，160，400，1000，1600，2000μg/mL；黃嘌呤和次黃嘌呤標準曲線的濃度點均為0.200，0.400，1.00，6.40，16.0，40.0，64.0，80.0μg/mL；肌酐標準曲線的濃度點為10.0，20.0，50.0，320，800，2000，3200，4000μg/mL；標準曲線樣品配制于替代基質中，替代基質為活性炭吸附后的人尿液；

對于尿酸，質控樣品包含4個濃度水平，分別為5.00(LLOQ QC),15.0(LQC),600(MQC),1500(HQC)μg/mL；

對于黃嘌呤和次黃嘌呤：質控樣品包含4個濃度水平，分別為0.0100(LLOQ QC),0.0300(LQC),1.20(MQC),3.00(HQC)μg/mL；

對于肌酐，質控樣品包含4個濃度水平，分別為10.0(LLOQ QC),30.0(LQC),1200(MQC),3000(HQC)μg/mL；

S6樣品處理：

取連排管，按如下描述加入樣品：對于雙空白樣品(Double Blank)、零空白樣品(ZeroBlank)，空白平衡樣品(Equil-Blank，如果有)加入50.0μL替代基質；對于標準曲線樣品、質控樣品、待測樣品、非空白平衡樣品(如果有)和系統適用性樣品(如果有)、ULOQ withoutIS(如果有)，加入50.0μL相應的基質樣品；

對于零空白樣品、標準曲線樣品、質控樣品、待測樣品、非空白平衡樣品(如果有)和系統適用性樣品(如果有)，加入25.0μL內標工作溶液；對于雙空白樣品(Double Blank)、空白平衡樣品(Equil-Blnak，如果有)和ULOQ without IS(如果有)，加入25.0μL 0.1％氨水溶液。

2.根據權利要求1所述的一種尿液檢測用新型高效液相-串聯質譜分析方法，其特征在于：所述含0.1％甲酸水溶液保存于室溫條件下，有效期自配制日起兩周內，所述含0.1％甲酸乙腈溶液保存于室溫條件下，有效期自配制日起兩周內。