[發明專利]貝萊斯芽孢桿菌DB219及其應用

有效

• 申請號: 202210506467.8
• 申請日: 2022-05-11
• 公開（公告）號: CN114806956B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 吳元鋒;張堯;胡嘉運;馬雨晨;孫娟;宋新杰;劉晨
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/54;C12R1/07
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

1.貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)DB219，其保藏編號為CGMCC No.24624。

2.如權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌DB219在制備凝乳酶中的應用。

3.利用權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌DB219制備凝乳酶的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將貝萊斯芽孢桿菌DB219涂布、劃線培養12h，然后接種于改良TYC培養基中37℃，180r/min震蕩培養10～12h得到種子液；

2)將上述種子液以5％體積比接種量接種于發酵培養基中于37℃，180r/min震蕩培養36～48h得發酵液，將所得到的發酵液低溫離心取上清液；

3)將硫酸銨與步驟2)中所得的上清液混合，于4℃下沉淀2h，低溫高速離心棄上清，收集沉淀，復溶于20mmol/L pH 7.0的Tris-HCl緩沖液中，于4℃下攪拌透析12h，經冷凍干燥后得粗制凝乳酶粉末；

4)將粗酶溶于20mmol/L pH 7.0的Tris-HCl緩沖液，通過0.22μm濾膜，經DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析分離純化并透析、凍干后得到凝乳酶產品。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟1)中改良TYC培養基為：葡萄糖50g，酪蛋白胨15g，氯化鈉1g，碳酸氫鈉2g，L-胱氨酸0.2g，磷酸氫二鈉2g，酵母膏5g，去離子水定容至1000mL，115℃滅菌20min；所述步驟2)中發酵培養基為：去離子水1000mL，熟小麥細麩皮20～60g，可溶性淀粉10g，玉米漿3g，115℃滅菌20min。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟3)中硫酸銨與上清液混合的混合液，其硫酸銨飽和度為60％。

6.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟3)中冷凍干燥以及步驟4)中凍干參數為：-80℃預凍300min；-80℃凍干800min。

7.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟4)中DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換柱，體積為5mL，起始洗脫條件為20mmol/L pH 8.5的Tris-HCl緩沖液，流速為0.5mL/min。

8.如權利要求3所述的方法，其特征在于所述步驟4)中透析條件為：4℃下攪拌透析12h。

9.一種如權利要求3～8任意一項所述方法制備得到的凝乳酶。