[發(fā)明專(zhuān)利]一種銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法及富集裝置

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210503332.6
• 申請(qǐng)日: 2022-05-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114774323A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張立軍;范輝;劉克成;韓鶴松;宮云茜;石榮雪
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 國(guó)網(wǎng)河北省電力有限公司電力科學(xué)研究院;國(guó)家電網(wǎng)有限公司;國(guó)網(wǎng)河北能源技術(shù)服務(wù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/20
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/20;C12N1/38;C12M1/12;C12M1/36;C12M1/04;C12M1/00;C12R1/385
• 代理公司: 石家莊國(guó)為知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 13120
• 代理人: 張羅濤

本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開(kāi)一種銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法及富集裝置。所述銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法包括以下步驟：a、取銅綠假單胞菌進(jìn)行活化后，搖培，得到菌液；b、向所述菌液中加入甘油溶液，然后低溫處理，得到處理菌液；c、將所述處理菌液接種至培養(yǎng)液中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在所述富集培養(yǎng)過(guò)程中連續(xù)加入培養(yǎng)液，并不斷排出培養(yǎng)廢液，直至富集培養(yǎng)液中的菌體濃度達(dá)到富集濃度。本發(fā)明提供銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法可以保證銅綠假單胞菌在富集培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液始終保持碳源充足，適合大批量連續(xù)擴(kuò)增繁殖，且菌種在連續(xù)長(zhǎng)期高濃度繁殖過(guò)程中可長(zhǎng)時(shí)間維持自身的繁殖能力和活性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法及富集裝置。

背景技術(shù)

目前，銅綠假單胞菌在實(shí)驗(yàn)室的富集培養(yǎng)方法均采用搖床震蕩培養(yǎng)，這種培養(yǎng)方式具有以下缺點(diǎn)：1)碳源供應(yīng)與菌種生長(zhǎng)速度不匹配。由于搖床震蕩培養(yǎng)屬于批式培養(yǎng)，營(yíng)養(yǎng)液一次性加入，這就造成培養(yǎng)初期由于細(xì)菌量較少，碳源供應(yīng)過(guò)量；而在培養(yǎng)后期，細(xì)菌大量增長(zhǎng)導(dǎo)致碳源不足，致使細(xì)菌增殖速度降低甚至停止。2)現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室的條件有限，搖床震蕩培養(yǎng)采用的培養(yǎng)瓶體積較小，一次性培養(yǎng)出的細(xì)菌量非常有限，當(dāng)細(xì)菌需求量較大時(shí)往往需要采用多臺(tái)搖床和大量培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)過(guò)程非常繁瑣。3)菌種在連續(xù)長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中易出現(xiàn)活性降低，繁殖能力下降較快。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法及富集裝置，該培養(yǎng)方法保證銅綠假單胞菌在富集培養(yǎng)過(guò)程中，菌種代謝產(chǎn)物和廢棄的營(yíng)養(yǎng)液不斷排出，使菌種在富集培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液始終保持碳源充足，適合大批量擴(kuò)增繁殖，且菌種在連續(xù)長(zhǎng)期高濃度繁殖過(guò)程中可長(zhǎng)時(shí)間維持自身的繁殖能力和活性。

為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例采用了如下的技術(shù)方案：

一種銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

a、取銅綠假單胞菌進(jìn)行活化后，接種至培養(yǎng)液中，搖培40-50h，得到菌液；

b、向所述菌液中加入甘油溶液，所述甘油溶液加入量為所述菌液體積的10％-20％，然后置于0-4℃下低溫處理10h-12h，得到處理菌液；

c、將所述處理菌液接種至培養(yǎng)液中進(jìn)行富集培養(yǎng)，在所述富集培養(yǎng)過(guò)程中連續(xù)加入所述培養(yǎng)液，并不斷排出培養(yǎng)廢液，直至富集培養(yǎng)液中的菌體濃度達(dá)到富集濃度；其中，所述培養(yǎng)廢液通過(guò)超濾膜管組件排出。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌的富集培養(yǎng)方法，通過(guò)培養(yǎng)液的連續(xù)加入和廢液的不斷排出，可以保證富集培養(yǎng)過(guò)程中的培養(yǎng)液始終處于碳源充足狀態(tài)，不存在代謝產(chǎn)物過(guò)度累積問(wèn)題。同時(shí)，通過(guò)菌種的低溫?fù)u培結(jié)合菌液的低溫甘油處理，以及后續(xù)的富集培養(yǎng)條件，可保證菌種在連續(xù)富集培養(yǎng)過(guò)程中始終保持較好的活性和增殖速度，進(jìn)而可以保證菌種的長(zhǎng)期高速生長(zhǎng)。

優(yōu)選的，步驟a中，每升所述培養(yǎng)液的配方為：胰蛋白胨8-12g、酵母浸粉4-6g、氯化鈉8-12g和余量的無(wú)菌水。

優(yōu)選的，步驟a中，所述搖培的溫度為25℃-28℃、轉(zhuǎn)速為150-250r/min。

優(yōu)選的，步驟b中，所述甘油溶液的體積濃度為4％-6％。

優(yōu)選的，步驟c中，所述菌液的接種體積為5％-15％。

優(yōu)選的，步驟c中，每升所述培養(yǎng)液的配方為：胰蛋白胨8-12g、酵母浸粉4-6g、氯化鈉8-12g和余量的無(wú)菌水。

優(yōu)選的，所述富集培養(yǎng)的溫度為35℃-38℃。

優(yōu)選的，步驟c中，加入的所述培養(yǎng)液和排出的所述培養(yǎng)廢液的速率相同，每小時(shí)加入的所述培養(yǎng)液和排出的所述培養(yǎng)廢液的量均為所述富集培養(yǎng)液體積的2.5％-5％。