[發明專利]一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒及其檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202210502964.0
• 申請日: 2022-05-09
• 公開（公告）號: CN115047191A
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 王楷文;趙江峰;曹勵歐;葉霜
• 申請（專利權）人: 上海市嘉定區中心醫院（上海健康醫學院附屬嘉定區中心醫院;上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院嘉定分院）
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/58;G01N33/543;C12N9/00
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 呂楚姍

1.一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，包括：

純化后的優勢抗原表位OJ蛋白，所述純化后的優勢抗原表位OJ蛋白所對應的氨基酸序列SEQ NO.1所示。

2.如權利要求1所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述純化后的優勢抗原表位OJ蛋白對應的全長蛋白結構如SEQ NO.2所示。

3.如權利要求1所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述純化后的優勢抗原表位OJ蛋白由如SEQ NO.3、4所示的引物對擴增得來，所述引物對所對應的序列如下：

F:ccaccgccttgctgaca；

R:ccctgctcctagtagtaaaccttagaatc。

4.如權利要求1所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒中還包括：

至少一包被所述優勢抗原表位OJ蛋白的96孔酶標板。

5.如權利要求1或4中任一項所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述ELISA試劑盒中還包括：

陰性對照血清、陽性對照血清、血清稀釋液、酶標二抗、洗滌液、底物顯色液、終止液；

所述陰性對照血清為抗合成酶綜合征患者免疫印跡法檢測抗OJ抗體陰性血清；

所述陽性對照血清為抗合成酶綜合征患者免疫印跡法檢測抗OJ抗體陽性血清；

所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgG。

6.如權利要求5所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒，其特征在于，所述血清稀釋液為含0.5％BSA的PBS溶液。滌液為PBST，濃度為1％。底物顯色液為四甲基聯苯胺(TMB)；終止液為0.5％的稀硫酸溶液。

7.如權利要求1-6當中任一項所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

利用所述96孔酶標板包被所述優勢抗原表位OJ蛋白后在4℃的環境溫度下包被過夜；

采用所述PBST洗滌液對多余的包被液進行去除，重復3-5次洗滌步驟；

在96孔酶標板的單孔中加入300ul，1％濃度的BSA溶液，在37℃下溫育2小時后采用所述PBST進行洗滌，重復3-5次；

在96孔酶標板的單孔中加入100ul的所述陰性/陽性對照血清作為標準品和100ul的待測血清，常溫溫育1小時；

將溫育后的殘余溶液采用PBST洗滌液進行洗滌，重復3-5次洗滌步驟；

以1：60000的比例加入所述酶標二抗后常溫溫育30分鐘；

將溫育后的殘余溶液采用PBST洗滌液進行洗滌，重復3-5次洗滌步驟；

加入所述底物顯色液四甲基聯苯胺(TMB)進行顯色，顯示完成后采用終止液終止反應；

在450/630nm酶標儀下讀數。

8.如權利要求7所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述陽性對照血清作為標準品的稀釋及空白對照標準如下：

稀釋梯度為：1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280，1：2560；

空白對照采用100ul PH＝7.2的PBS緩沖液。

9.如權利要求7所述的一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述優勢抗原表位OJ蛋白的濃度為5ug/ml，每個反應孔中加100ul。

10.如權利要求1-6當中任一項所述一種用于檢測抗OJ抗體的ELISA試劑盒的應用，其特征在于，所述應用為用于抗OJ抗體檢測。