[發明專利]基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子膠水

在審

• 申請號: 202210502251.4
• 申請日: 2022-05-10
• 公開（公告）號: CN114656549A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 沈月全;楊雪;龍加福;陳曉哲
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K7/06;C07K1/10
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超

本發明公開一種基于TIP?1?多肽相互作用的新型分子膠水及其在蛋白非共價偶聯中的應用，分子膠水包括能夠特異性結合的TIP?1蛋白和β?catenin蛋白的C末端多肽，經測試可知，二者的親和力達到了0.41μM，TIP?1蛋白能夠以異常高的親和力專一性地結合β?catenin蛋白的C末端多肽；將分子膠水的兩個組分分別連接在兩個待連接的蛋白上，則能夠實現這兩個蛋白的非共價偶聯，尤其用于疏水特性顯著的膜蛋白時，也能夠實現高效特異性的非共價偶聯，從而介導膜蛋白復合物中不同組分之間的相互作用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是涉及一種基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子膠水。

背景技術

膜蛋白與普通的水溶性蛋白之間性質相差比較大。膜蛋白需要在溶液中存在一定濃度的去污劑才能穩定。去污劑在溶液中形成膠束，包圍住膜蛋白的疏水性表明區域，形成膜蛋白-去污劑膠束復合物，這樣膜蛋白才能在離開膜的天然環境穩定存在在溶液中。由于去污劑具有一定的疏水性，很大程度上減弱了兩個膜蛋白之間的相互作用力。因此，體外重組膜蛋白復合物的時候，經常需要用到分子膠水幫助復合物的各個組分提高相互間的親和力。這些工具需要滿足以下條件：1，高穩定性。在多種不同條件下能夠保持構象的完整性；2，結合力高。在去污劑條件下，也能有很高的親和力；3，不干擾生物學功能。工具本身沒有生物學活性，不會誘導其他蛋白的構象變化；4，非共價耦聯。在需要的時候，可以借助條件變化來打開兩個蛋白之間的耦聯。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供一種基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子膠水。

本發明采用的技術方案是：基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子膠水，包括能夠特異性結合的TIP-1蛋白和β-catenin蛋白的C末端多肽。

優選地，TIP-1蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，β-catenin蛋白的C末端多肽序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.1：

MSYIPGQPVTAVVQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPFSEDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGLQIGDKIMQVNGWDMTMVTHDQARKRLTKRSEEVVRLLVTRQSLQKAVQQSMLS

SEQ ID NO.2：QLAWFDTDL

新型分子膠水在蛋白非共價偶聯中的應用。

優選地，用于膜蛋白間的非共價偶聯。

優選地，TIP-1蛋白連接在第一蛋白的N端或C端；β-catenin蛋白的C末端多肽連接第二蛋白的C端，第一蛋白與第二蛋白非共價偶聯。

本發明具有的優點和積極效果是：TIP-1能夠以異常高的親和力專一性地結合β-catenin蛋白的C末端，TIP-1和多肽的相互作用可以用來作為分子膠水來介導膜蛋白復合物中不同組分之間的相互作用。

附圖說明

圖1是實施例1中TIP-1重組蛋白的考馬斯亮藍G250染色圖；

圖2是實施例1中示意圖ITC滴定結果圖；

圖3是實施例2中分子膠水質粒構建示意圖；

圖4是實施例2中膜蛋白復合物親和純化考馬斯亮藍G250染色圖；M為標準分子量，L為細胞裂解液，FT為上親和柱后沒有柱子的流穿溶液，E1和E2為洗脫液；B為親和柱子殘留；

圖5是實施例2中分子膠水耦聯的膜蛋白復合物親和純化考馬斯亮藍G250染色圖；M為標準分子量，L為細胞裂解液，FT為上親和柱后沒有柱子的流穿溶液，E1-4為洗脫液；B為親和柱子殘留。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明的實施例做出說明。