[發明專利]純化和/或病毒滅活的方法

在審

• 申請號: 202210499038.2
• 申請日: 2016-06-24
• 公開（公告）號: CN115028675A
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 詹尼·阿哈羅諾夫;艾琳諾·弗里茲;艾里·哈羅什
• 申請（專利權）人: 輝凌公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/34;A61K38/14
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 關旭穎;吳小明

本發明涉及蛋白質(例如糖蛋白)的純化和/或病毒滅活的方法，所述方法包括用辛酸和乙醇的組合處理所述蛋白質(例如糖蛋白)的步驟。

本發明涉及蛋白質(或蛋白質產品)的純化方法和/或蛋白質(或蛋白質產品)的病毒滅活方法。本發明涉及糖蛋白(或糖蛋白產品)的純化方法和/或糖蛋白(或糖蛋白產品)的病毒滅活方法。蛋白質/糖蛋白可以是例如在宿主細胞中產生的重組糖蛋白，諸如FSH、hCG或LH。蛋白質/糖蛋白可以是來源于尿的。

許多糖蛋白用于治療性治療。例如，促性腺激素是一類用于治療不育的糖蛋白。促性腺激素是一組異源二聚糖蛋白激素，其調節雄性和雌性中的性腺功能。它們包括促卵泡激素(FSH)、黃體生成素(LH)和絨毛膜促性腺激素(CG)。

從懷孕的和更年期后的女性的尿中提取的FSH和hCG已經在不育治療中使用了許多年。從尿中提取的FSH和hCG的產生涉及大量尿的收集和處理。

作為來源于尿的產品的備選方案，重組形式的FSH和hCG是可用的。目前批準的產品(來自Merck Serono的Gonal-F,Ovitrelle；來自MSD的Puregon)在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中產生(表達)。

本申請人已經開發了重組FSH和重組hCG，兩者均在細胞系中表達。來源于細胞系的FSH產品及其生產方法在國際專利申請號PCT/GB2009/000978(公開為WO2009/127826A)和PCT/EP2012/065507(公開為WO2013/020996)中公開。該產品(FE999049)已經在歐洲完成了III期臨床試驗。來源于細胞系的重組hCG產品及其生產方法在PCT/GB2010/001854(公開為WO2011/042688)中公開。

本申請人已經開發了可以用于純化例如在哺乳動物細胞系中產生的重組FSH和重組hCG的技術(例如，WO2009/127826A和WO2013/020996中公開的重組FSH，和WO2011/042688中公開的重組hCG)。

根據本發明，在第一個方面，提供了一種純化蛋白質[例如，糖蛋白，例如重組糖蛋白，(例如重組的)促性腺激素，(例如重組的)FSH、hCG或LH]的方法，所述方法包括用辛酸和乙醇的組合處理所述蛋白質[例如，糖蛋白，例如重組糖蛋白，(例如重組的)促性腺激素，(例如重組的)FSH、hCG或LH]的步驟。

所述方法可以包括用辛酸和乙醇的組合處理蛋白質的溶液[例如，在水、緩沖液或其它介質(例如，緩沖液；100 mM乙酸銨，30-50 mM NaCl，pH 9-pH 9.5)中]。所述方法可以包括在pH 6.5至12，例如pH 7.5至10，例如pH 9至9.5處理在緩沖液(例如乙酸銨緩沖液)中的蛋白質(例如糖蛋白)的溶液。

用辛酸和乙醇的組合處理糖蛋白的步驟可以在酸性pH進行，例如在pH 2至pH6.5，例如pH 3至pH 6.5，例如pH 4至pH 6(例如pH 5.5±0.1)，優選pH 4.5至pH 5.5]進行。使用酸性條件(例如，pH 4–pH 6)歸因于辛酸活性。辛酸能夠通過破壞病毒膜來滅活包膜病毒；這通過辛酸的不帶電形式(其能夠穿透病毒疏水膜)實現。辛酸在接近其pKa的pH(pH4.9)是不帶電的。在1單位升高的ΔpH(～pH 5.9)下，100％的辛酸分子帶負電荷，并且因此對病毒滅活效率較低。

蛋白質可以是重組蛋白質或來源于尿的蛋白質。蛋白質可以是糖蛋白。蛋白質/糖蛋白可以是促性腺激素，例如FSH、hCG或LH。糖蛋白可以是重組糖蛋白，例如重組促性腺激素，例如重組FSH、hCG或LH。優選地，蛋白質/糖蛋白是通過以下方法在細胞(細胞系)中產生的重組糖蛋白(例如重組促性腺激素，例如重組FSH、hCG或LH)，所述方法包括在合適的培養基中培養細胞(細胞系)并且從所述細胞(細胞系)和/或所述培養基收獲重組糖蛋白(例如，從細胞培養上清中收獲重組蛋白質)。所述細胞(細胞系)可以是哺乳動物細胞(細胞系)，例如CHO細胞(系)，細胞(系)，HEK293細胞(系)，HT1080細胞(系)，COS細胞(系)，NOS細胞(系)，SP20細胞(系)等。優選地，細胞(細胞系)是細胞(系)。