[發(fā)明專利]一種利用聚球藻基因的啟動子檢測水體營養(yǎng)鹽生物可利用度的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210488031.0
• 申請日: 2022-05-06
• 公開（公告）號: CN114736842A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜海波;劉浩;王鑫威;黃海龍;韋嘉寧;趙夢潔;廖如蘭;殷克東
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué);南方海洋科學(xué)與工程廣東省實驗室（珠海）
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/65;C12N15/113;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

1.一種轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述轉(zhuǎn)基因聚球藻中含有對水體營養(yǎng)鹽缺乏敏感的聚球藻基因的啟動子序列和熒光蛋白基因片段組成的重組表達(dá)元件。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述重組表達(dá)元件為含有對水體營養(yǎng)鹽缺乏敏感的聚球藻基因的啟動子序列和熒光蛋白基因片段的重組表達(dá)載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述對水體營養(yǎng)鹽缺乏敏感的聚球藻基因為對氮、磷或鐵元素缺乏敏感的聚球藻基因。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述對氮元素缺乏敏感的聚球藻基因為A1821或D0010，所述對磷元素缺乏敏感的聚球藻基因為A2284或A2352，所述對鐵元素缺乏敏感的聚球藻基因為A1291或G0079。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述A1821基因的啟動子序列如SEQID NO.1所示，D0010基因的啟動子序列如SEQ ID NO.2所示；A2284基因的啟動子序列如SEQID NO.3所示，A2352基因的啟動子序列如SEQ ID NO.4所示；A1291基因的啟動子序列如SEQID NO.5所示，G0079基因的啟動子序列如SEQ ID NO.6所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～5任一所述轉(zhuǎn)基因聚球藻，其特征在于，所述聚球藻為聚球藻7002。

7.權(quán)利要求1～6任一所述轉(zhuǎn)基因聚球藻在檢測水體營養(yǎng)鹽生物可利用度中的應(yīng)用。

8.一種利用權(quán)利要求1～6任一所述轉(zhuǎn)基因聚球藻檢測水體營養(yǎng)鹽生物可利用度的方法，其特征在于，包含以下步驟：

S1.確定待測的營養(yǎng)鹽元素，配制含不同濃度梯度的待測營養(yǎng)鹽元素的培養(yǎng)基，將含有對待測營養(yǎng)鹽元素缺乏敏感的聚球藻基因的啟動子序列和熒光蛋白基因片段組成的重組表達(dá)元件的轉(zhuǎn)基因聚球藻置于所述不同濃度梯度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，測定熒光值，繪制營養(yǎng)鹽濃度與熒光值關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線；

S2.將與步驟S1相同的轉(zhuǎn)基因聚球藻置于待測水體樣品中，用與步驟S1相同的條件培養(yǎng)后測定熒光值，利用步驟S1所得標(biāo)準(zhǔn)曲線計算所測水體樣品中與標(biāo)曲對應(yīng)的營養(yǎng)鹽元素的濃度。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于，轉(zhuǎn)基因聚球藻的培養(yǎng)溫度為28～30℃，光照條件為100±10μE m^-2s^-1。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述方法，其特征在于，在繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線前，先將轉(zhuǎn)基因聚球藻置于對應(yīng)的缺素培養(yǎng)基中培養(yǎng)，進行饑餓處理。