[發(fā)明專利]一種用硅藻土固定芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)桿菌霉素D的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210487473.3
• 申請(qǐng)日: 2022-05-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114774498B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸穎健;孫靜;張進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京財(cái)經(jīng)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/14
• 分類號(hào): C12N11/14;C12P21/04;C07K7/58;A23B7/154;A23B9/26;A23K20/195;A61K38/12;A61P31/10
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 唐蕙芬

1.一種用硅藻土固定芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)桿菌霉素D的方法，其特征在于，是指在保藏號(hào)為CGMCC No.0943的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)fmbJ發(fā)酵過(guò)程中加入硅藻土進(jìn)行固定化發(fā)酵，獲得發(fā)酵上清液和沉淀物發(fā)酵殘?jiān)冒l(fā)酵上清液生產(chǎn)桿菌霉素D的方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將所述的含菌量為10⁸CFU/mL枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養(yǎng)基，接種量為1-10％(體積比)，33℃、180rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵至0-36h時(shí)添加硅藻土繼續(xù)發(fā)酵至72h，添加硅藻土的質(zhì)量比為0-5wt％，將第一次發(fā)酵完成的菌液4℃、5000g離心15min，取上清液用于生產(chǎn)桿菌霉素D，沉淀物用于下一次繼續(xù)發(fā)酵；

在第一次發(fā)酵沉淀物中繼續(xù)添加與第一次發(fā)酵等量的新鮮的Landy培養(yǎng)基進(jìn)行二次發(fā)酵；

第三次發(fā)酵操作同第二次發(fā)酵操作相同；

采用酸沉的方法提取三次發(fā)酵上清液中的桿菌霉素D，即為生產(chǎn)的桿菌霉素D。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，優(yōu)選含菌量為10⁸CFU/mL的枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養(yǎng)基，接種量為3-8％(體積比)，33℃、180rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵至6-24h時(shí)添加硅藻土繼續(xù)發(fā)酵至72h，添加硅藻土的質(zhì)量比為0-2wt％。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，進(jìn)一步優(yōu)選含菌量為10⁸CFU/mL的枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養(yǎng)基，接種量為4-6％(體積比)，33℃、180rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵至12-24h時(shí)添加硅藻土繼續(xù)發(fā)酵至72h，添加硅藻土的質(zhì)量比為0.2-0.8wt％。

5.用權(quán)利要求1-4之一所述的方法生產(chǎn)的桿菌霉素D。

6.權(quán)利要求5所述桿菌霉素D的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，是指桿菌霉素D在糧食貯藏、果蔬保鮮、醫(yī)療或動(dòng)物飼料方面的應(yīng)用。

8.用權(quán)利要求1-4之一所述方法生產(chǎn)的微生物制劑，其特征在于，將所述的沉淀物發(fā)酵殘?jiān)娓傻玫轿⑸镏苿稍锏臏囟?0-70℃。

9.權(quán)利要求8所述微生物制劑的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，是指微生物制劑在糧食貯藏、果蔬保鮮以及動(dòng)物飼料方面的應(yīng)用。