[發明專利]一種用硅藻土固定芽孢桿菌發酵生產桿菌霉素D的方法

有效

• 申請號: 202210487473.3
• 申請日: 2022-05-06
• 公開（公告）號: CN114774498B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 陸穎健;孫靜;張進
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12P21/04;C07K7/58;A23B7/154;A23B9/26;A23K20/195;A61K38/12;A61P31/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐蕙芬

1.一種用硅藻土固定芽孢桿菌發酵生產桿菌霉素D的方法，其特征在于，是指在保藏號為CGMCC No.0943的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)fmbJ發酵過程中加入硅藻土進行固定化發酵，獲得發酵上清液和沉淀物發酵殘渣，用發酵上清液生產桿菌霉素D的方法。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述的含菌量為10⁸CFU/mL枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養基，接種量為1-10％(體積比)，33℃、180rpm條件下進行發酵，發酵至0-36h時添加硅藻土繼續發酵至72h，添加硅藻土的質量比為0-5wt％，將第一次發酵完成的菌液4℃、5000g離心15min，取上清液用于生產桿菌霉素D，沉淀物用于下一次繼續發酵；

在第一次發酵沉淀物中繼續添加與第一次發酵等量的新鮮的Landy培養基進行二次發酵；

第三次發酵操作同第二次發酵操作相同；

采用酸沉的方法提取三次發酵上清液中的桿菌霉素D，即為生產的桿菌霉素D。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，優選含菌量為10⁸CFU/mL的枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養基，接種量為3-8％(體積比)，33℃、180rpm條件下進行發酵，發酵至6-24h時添加硅藻土繼續發酵至72h，添加硅藻土的質量比為0-2wt％。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，進一步優選含菌量為10⁸CFU/mL的枯草芽孢桿菌fmbJ接種于Landy培養基，接種量為4-6％(體積比)，33℃、180rpm條件下進行發酵，發酵至12-24h時添加硅藻土繼續發酵至72h，添加硅藻土的質量比為0.2-0.8wt％。

5.用權利要求1-4之一所述的方法生產的桿菌霉素D。

6.權利要求5所述桿菌霉素D的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，是指桿菌霉素D在糧食貯藏、果蔬保鮮、醫療或動物飼料方面的應用。

8.用權利要求1-4之一所述方法生產的微生物制劑，其特征在于，將所述的沉淀物發酵殘渣烘干得到微生物制劑，干燥的溫度30-70℃。

9.權利要求8所述微生物制劑的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，是指微生物制劑在糧食貯藏、果蔬保鮮以及動物飼料方面的應用。