[發明專利]一株表達非洲豬瘟病毒P54基因重組偽狂犬病毒基因工程疫苗及其應用

在審

• 申請號: 202210480604.5
• 申請日: 2022-05-05
• 公開（公告）號: CN115637260A
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 童武;周艷君;童光志;包瑋玲;高飛;鄭浩;李國新;于海;單同領;姜一峰;虞凌雪;劉長龍;李麗薇;孔寧
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/34;C12N15/85;C12N15/65;A61K39/295;A61K39/245;A61K39/12;A61P31/20;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一株表達非洲豬瘟病毒P54基因重組偽狂犬病毒基因工程疫苗，其特征在于，所述重組偽狂犬病毒基因工程疫苗中表達外源的非洲豬瘟病毒P54基因，缺失偽狂犬病病毒中的gI和gE基因。

2.如權利要求1所述的重組偽狂犬病毒基因工程疫苗，所述重組偽狂犬病毒基因工程疫苗為JS-2012-ΔgE/gI+P54株。

3.如權利要求1所述的表達非洲豬瘟病毒P54基因的重組偽狂犬病毒株，所述病毒株(JS-2012-ΔgE/gI+P54株)，于2022年4月16日保藏于中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，地址為湖北省武漢市武昌區八一路299號武漢大學保藏中心，其保藏號為CCTCCNo:V202229。

4.一種重組偽狂犬病毒基因工程疫苗的制備方法，包括以下步驟：

(1)構建重組載體，設計引物擴增同源重組的左、右重組臂，酶切CMV啟動子-EGFP基因片段、SV40 polyA信號序列片段，并將左重組臂-CMV啟動子-EGFP基因-SV40polyA信號序列-右重組臂依序組裝于獲得了重組轉移載體；

(2)提取偽狂犬病毒JS-2012-△gI/gE株總DNA，將該總DNA與步驟(1)的重組載體共轉染細胞，獲得含EGFP熒光標記的重組偽狂犬病毒；

(3)構建攜帶P54的重組載體，所述重組載體為利用P54蛋白替換了步驟(1)重組載體中的EGFP基因；

(4)提取步驟(2)獲得的重組偽狂犬病毒的總DNA，將該總DNA與步驟(3)的攜帶P54的重組載體共轉染細胞，獲得不包含EGFP熒光標記的重組偽狂犬病毒，該重組偽狂犬病毒即為重組偽狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgE/gI+P54株。

5.一種疫苗組合物，所述組合物包含與佐劑或藥用載體混合的重組偽狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgE/gI+P54株。

6.一種如權利要求1所述的重組偽狂犬病毒基因工程疫苗JS-2012-ΔgE/gI+P54株在制備預防或治療偽狂犬病及豬瘟的疫苗中的應用。