[發(fā)明專利]一種抗大熊貓PRL單克隆抗體、雜交瘤細(xì)胞株及PRL酶聯(lián)免疫檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210475381.3
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號: CN114624452A
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡開來;張夢詩;王東輝;王神飛;胡賢彪;李非平;王涓;劉玉良;侯蓉;蘭景超;吳永勝
• 申請（專利權(quán)）人: 成都大熊貓繁育研究基地
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;C07K16/26;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 成都正德明志知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51360
• 代理人: 張小娟

1.一種大熊貓催乳素酶聯(lián)免疫檢測方法，其特征在于，以雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1和/或雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5分別產(chǎn)生的抗大熊貓PRL單克隆抗體進(jìn)行檢測；

其中，所述雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1的保藏編號為CCTCC NO:C202183；雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5的保藏編號為CCTCC NO:C202172，均于2021年10月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大熊貓催乳素酶聯(lián)免疫檢測方法，其特征在于，對大熊貓催乳素進(jìn)行檢測時，使用雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1和雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5產(chǎn)生的抗大熊貓PRL單克隆抗體分別作為一抗或二抗。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大熊貓催乳素酶聯(lián)免疫檢測方法，其特征在于，所述抗大熊貓PRL單克隆抗體由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的大熊貓催乳素特異序列作為免疫原，并由雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1和PRL-5分泌。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的大熊貓催乳素酶聯(lián)免疫檢測方法，其特征在于，以大熊貓尿液作為檢測底物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的大熊貓催乳素酶聯(lián)免疫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將大熊貓尿液加入至抗大熊貓PRL單克隆抗體包被的酶標(biāo)板中，同時加入PRL重組蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，于35～37℃孵育30～35min；

(2)用洗滌液洗滌酶標(biāo)板后，加入抗大熊貓PRL單克隆抗體-HRP復(fù)合物，于35～37℃孵育30～35min；

(3)用洗滌液洗滌酶標(biāo)板后，加入底物顯色試劑，于室溫孵育5～10min后，加入反應(yīng)終止液停止反應(yīng)；

(4)用酶標(biāo)儀測量并計算PRL含量即可。

6.權(quán)利要求1～5任一項所述的檢測方法，或權(quán)利要求1～3任一項所述的抗大熊貓PRL單克隆抗體在對大熊貓妊娠期的胚胎發(fā)育監(jiān)測中的應(yīng)用。

7.一種試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1～3中任一項所述的雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1和/或雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5分別產(chǎn)生的抗大熊貓PRL單克隆抗體。

8.一種載體，其特征在于，包括權(quán)利要求1～3中任一項所述的抗大熊貓PRL單克隆抗體。

9.權(quán)利要求7所述的試劑盒，或權(quán)利要求8所述的載體在大熊貓催乳素檢測，或?qū)Υ笮茇埲焉锲诘呐咛グl(fā)育監(jiān)測中的應(yīng)用。

10.一種抗大熊貓PRL單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，其特征在于，所述雜交瘤細(xì)胞株為雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1和/或雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5，所述雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-1的保藏編號為CCTCCNO:C202183；雜交瘤細(xì)胞株P(guān)RL-5的保藏編號為CCTCC NO:C202172，均于2021年10月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心。