[發明專利]一種葉酸及其代謝物的樣本前處理方法以及檢測方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202210474366.7
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號: CN114646713A
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 李云龍;栗琳;邵立軍;劉勝敏;孫敬茹;周立;丁亮;錢俊伯
• 申請（專利權）人: 北京豪思生物科技股份有限公司;江蘇豪思睦可生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02;G01N30/72;G01N33/82
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 王闖

1.一種葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，其包括：將紅細胞裂解后的血液樣本、內標溶液與保護劑混合，得到加標樣本，所述保護劑包括抗壞血酸和巰基乙醇；在所述加標樣本中，所述抗壞血酸的質量分數為0.1％～2％，所述巰基乙醇的體積分數≥0.1％；

將所述加標樣本進行蛋白失活、水解孵育和固相萃取后，用于后續對樣本中的葉酸及其代謝物的液相色譜串聯質譜檢測。

2.根據權利要求1所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，在所述加標樣本中，所述抗壞血酸的質量分數為0.1％～2％，優選為0.5％～1％；

優選地，在所述加標樣本中，所述巰基乙醇的體積分數為0.1％～2％，優選為0.2％～1％；

優選地，所述保護劑為含有抗壞血酸和巰基乙醇的水溶液。

3.根據權利要求1所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，將進行所述蛋白失活前，所述方法還包括對加標樣本進行凍融裂解；

優選地，所述凍融裂解的條件包括：溫度為-20～-90℃，時間為10～60分鐘；

優選地，所述凍融裂解的次數為1～2次；

優選地，所述方法還包括將待凍融裂解的樣本進行分裝，分裝為50～150μl。

4.根據權利要求1～3任一項所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，所述蛋白失活的條件為：60～100℃，金屬浴1～30min，優選為10～20min。

5.根據權利要求1～3任一項所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，所述水解孵育的步驟包括：在蛋白失活后的樣本中添加動物血清，然后于30～45℃孵育3h以上，優選為3～24h；

優選地，所述動物血清選自大鼠血清、小鼠血清和人血清中的至少一種，優選為大鼠血清。

6.根據權利要求1～3任一項所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法，其特征在于，所述固相萃取包括：活化、平衡、上樣、淋洗和洗脫步驟；

優選地，所述活化采用的活化液包括甲醇；

優選地，所述平衡采用的平衡液包括0.01％～2％的氨水；

優選地，所述淋洗采用的淋洗液包括水；

優選地，所述洗脫采用的洗脫液包括：甲醇、甲酸和稀釋液；

優選地，所述稀釋液中含有抗壞血酸和巰基乙醇，抗壞血酸的質量分數為0.5％～2％，優選為0.5％～1.5％，巰基乙醇的體積分數為≥0.1％，優選為0.1％～2％；

優選地，在所述洗脫液中，甲醇的體積分數為85％～95％，優選為88％～92％，所述稀釋液的體積分數為3％～13％，優選為6％～10％，甲酸的體積分數為0.1％～5％，優選為1％～5％。

7.一種葉酸及其代謝物的檢測方法，其特征在于，其包括采用如權利要求1～6任一項所述的葉酸及其代謝物的樣本前處理方法對樣本進行前處理，然后對樣本中的葉酸及其代謝物的液相色譜串聯質譜檢測；所述方法不以疾病的診斷或治療為直接目的。