[發(fā)明專利]一種核酸提取試劑及其試劑盒以及快速萃取分離純化核酸的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210471922.5
• 申請(qǐng)日: 2022-04-29
• 公開（公告）號(hào): CN114908081A
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐小寅;張文彬;郝夢(mèng)雅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 浙江千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 趙芳

本發(fā)明公開了一種核酸提取試劑，包括親蛋白類的有機(jī)化合物、鹽、去分相試劑和純水，基于所述的親蛋白類的有機(jī)化合物、鹽、去分相試劑和純水，各組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：親蛋白類的有機(jī)化合物30～60％、鹽20％～40％、去分相試劑5～15％，純水10～30％。本發(fā)明還提供所述核酸提取試劑用來快速萃取分離純化核酸的應(yīng)用。本發(fā)明的核酸萃取方法只需將生物樣本加入一個(gè)核酸提取試劑溶液中，該溶液包含了裂解生物樣本和萃取核酸兩個(gè)功能，混勻后離心，即可達(dá)到裂解樣本和萃取核酸一步完成的效果。同時(shí)，由于在上清液中已經(jīng)含有高濃度的鹽溶液，可以直接取上清加入含有二氧化硅介質(zhì)的純化柱中進(jìn)行核酸的進(jìn)一步純化。本發(fā)明無需加入氯仿即可萃取核酸，簡便、快速，成本低廉。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種核酸提取試劑及其試劑盒以及快速萃取分離純化核酸的方法。

背景技術(shù)

核酸包括脫氧核糖核酸(核酸)和核糖核酸(RNA),是所有生命個(gè)體遺傳物質(zhì)的載體。隨著現(xiàn)代基因檢測技術(shù)不斷地應(yīng)用到各行各業(yè)中，核酸的分離純化技術(shù)成為一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)。

傳統(tǒng)的核酸萃取分離法純化方法是用SDS(十二烷基磺酸鈉)、硫氰酸胍、CTAB(cetyltrimethylammoniumbromide,CTAB.十六烷基三甲基溴化銨)TX-100、等試劑裂解生物樣本，然后經(jīng)酚/氯仿(有毒性)萃取去除蛋白質(zhì)，使核酸釋放到水相上清中，上清液中的核酸再經(jīng)乙醇或異丙醇沉淀回收。傳統(tǒng)的核酸萃取方法通常需要經(jīng)過溶解樣本、酚氯仿抽提、醇沉淀核酸、核酸洗滌與干燥、核酸的重溶5個(gè)步驟，操作起來非常復(fù)雜，并且純化的核酸中仍存留一部分蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)，需采用其它形式的純化方法進(jìn)一步純化核酸。

具體的，現(xiàn)有的核酸分離純化技術(shù)主要為以下幾種：

1.SDS酚氯仿抽提法：采用SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K液溶解生物樣本，再加入酚/氯仿抽提消化后的生物樣本，經(jīng)離心收集含有核酸上清液，再經(jīng)乙醇或異丙醇沉淀收集核酸，再進(jìn)行進(jìn)一步純化。該種方法主要用于動(dòng)物組織DNA的分離純化，并且含有核酸的上清液需要經(jīng)過醇沉的沉淀除去SDS后才可過柱，或者需要加入高濃度鹽溶液作為柱純化結(jié)合液，才能進(jìn)一步純化。含有核酸的上清液無法直接加入二氧化硅介質(zhì)的純化柱中對(duì)核酸做進(jìn)一步純化。

2.CTAB氯仿抽提法：先在研缽中研碎生物樣本，再加入CTAB緩沖液溶解已研碎的生物樣本中的細(xì)胞，然后加入氯仿抽提溶解后的細(xì)胞釋放物，經(jīng)離心收集含有核酸上清液，再經(jīng)乙醇或異丙醇沉淀收集核酸。該種方法主要用于植物等雜質(zhì)較多的生物樣本的核酸分離純化，同樣含有核酸的上清液也無法直接加入二氧化硅介質(zhì)的純化柱中對(duì)核酸做進(jìn)一步純化。

3.Trizol試劑法：Trizol試劑主要由硫氰酸胍、乙酸及苯酚混合而成。加入Trizol溶解已經(jīng)被研碎的生物樣本，然后加入氯仿萃取溶解物中的苯酚，經(jīng)離心氯仿與苯酚形成下層有機(jī)相(包括易溶于苯酚的、或者被苯酚變性的一些蛋白質(zhì)和DNA)，RNA溶解在上層水相，上層水相再經(jīng)異丙醇沉淀收集RNA。該種方法主要用于生物樣本的RNA分離純化。

綜上所述，三種傳統(tǒng)的核酸萃取方法無一例外均需要加入氯仿抽提，用作萃取苯酚或者CTAB等有機(jī)化合物，其本質(zhì)是吸附溶解在這些苯酚或者CTAB中的蛋白質(zhì)，達(dá)到將蛋白質(zhì)與核酸分子分離的目的。

氯仿是一種無色透明液體，有特殊氣味，味甜，高折光，不燃，質(zhì)重，易揮發(fā)的試劑。氯仿純品對(duì)光敏感，遇光照會(huì)與空氣中的氧作用，逐漸分解而生成劇毒的光氣(碳酰氯)和氯化氫。對(duì)人體有毒害作用，主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，且被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)列入2B類致癌物清單中，因此《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南.精編版》679頁，附錄4明確指出使用氯仿時(shí)要戴合適的手套和安全眼鏡并始終在化學(xué)通風(fēng)櫥里進(jìn)行。

隨著當(dāng)今市場上核酸檢測技術(shù)的進(jìn)一步普及應(yīng)用，市場迫切要求一種不需要添加氯仿的核酸萃取方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的技術(shù)目的是，提供一種無需氯仿的核酸提取試劑，并提供含有該核酸提取試劑的試劑盒，可利用所述試劑盒對(duì)核酸進(jìn)行快速萃取分離純化。