[發明專利]用于定性和定量檢測骨髓瘤細胞的試劑及其用途

在審

• 申請號: 202210466166.7
• 申請日: 2022-04-29
• 公開（公告）號: CN114592044A
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 何霆;魯薪安;劉光華;謝城源;施瑞娜
• 申請（專利權）人: 北京藝妙神州醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 吳溪;張擁

本發明提供了用于定性和定量檢測骨髓瘤細胞的試劑，其包括特異性結合NCI?H929 c?myc基因的引物；優選地，所述試劑還包括特異性結合NCI?H929 c?myc基因的探針。特別地，所述試劑包括具有如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示核苷酸序列的引物和具有如SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探針。本發明還提供了所述試劑制備用于檢測人或動物中骨髓瘤細胞負荷的檢測劑的用途。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體而言，本發明涉及用于檢測人或動物中骨髓瘤細胞負荷的引物和探針。

背景技術

多發性骨髓瘤（Multiple Myeloma，簡寫成MM）是一種漿細胞克隆性疾病，可導致高鈣血癥、貧血、腎功能損傷、骨破壞等癥狀。根據美國的統計數據，MM占所有癌癥的1%，占血液系統惡性腫瘤的10%。它是一類幾乎無法治愈的惡性腫瘤，好發于中老年，但近年發病率增高且發病年齡有提前的趨勢。

B細胞成熟抗原（B cell maturation antigen，簡寫成BCMA），也叫TNF受體超家族成員17（TNF receptor superfamily member 17，簡寫成TNFRSF17），主要在漿細胞和成熟B淋巴細胞中表達，在其它的正常人體細胞中基本檢測不到。BCMA在多發性骨髓瘤細胞表面高表達，可溶性的BCMA蛋白在患者血清中濃度升高，因此它是一個很好的治療靶點。針對BCMA的嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法、抗體藥物綴合物（ADC）和雙靶向抗體藥物都顯示出了治療多發性骨髓瘤的希望。BCMA正在成為CAR-T治療的熱點，因為與CD19靶點類似，BCMA-CAR-T治療后雖然也殺傷了正常的漿細胞，但患者可以通過免疫球蛋白給藥來維持機體免疫力。2021年3月27日上市的第五款CAR-T細胞產品——ABECMA靶向BCMA，用于治療復發性/難治性多發性骨髓瘤（R/R MM）成人患者。人骨髓瘤細胞NCI-H929因為在細胞表面高表達BCMA，在靶向BCMA的CAR-T細胞（BCMA-CAR-T）產品前期研究中常被用作靶細胞。

過繼性免疫細胞的藥代動力學研究是藥物臨床前評價的一個重要指標，可以為臨床給藥劑量及藥后觀察周期等提供重要的參考數據。此類研究主要在動物體內進行，主要關注細胞在荷瘤動物體內增殖、組織器官分布和存續時間等問題。以BCMA為靶點的CAR-T細胞藥代動力學研究一般先使用BCMA陽性腫瘤細胞（如NCI-H929）建立多發性骨髓瘤模型，然后注射CAR-T細胞，以觀察在腫瘤發生的情況下CAR-T細胞在體內的分布，最大限度模擬CAR-T細胞應用于患者體內的情況。

目前檢測CAR-T細胞的方法主要是定量PCR，因為不需要導入特殊的標簽基因，樣本制備方法簡單且可以長期存放、試驗耗時短。由于需要闡明CAR-T細胞分布與腫瘤負荷之間的關系，因此在檢測CAR-T細胞的同時也需要檢測腫瘤負荷。檢測腫瘤負荷的一般手段是在腫瘤細胞中導入熒光素酶標簽基因，通過活體成像來檢測腫瘤負荷情況。但是，此操作比較繁瑣，需要特殊儀器，成本較高；導入熒光素酶標簽基因有可能會影響靶細胞的活性和生存；另外，不能判定腫瘤細胞的確切位置也無法進行腫瘤細胞的絕對定量。因此，亟需開發一種簡單易操作的檢測多發性骨髓瘤細胞負荷的方法。

發明內容

本發明設計特異性針對骨髓瘤細胞的引物和探針，用于對骨髓瘤細胞進行定性和定量檢測，以及檢測不同時間點動物體內腫瘤負荷。

第一方面，本發明提供了用于定性和定量檢測骨髓瘤細胞的試劑，其包括特異性結合NCI-H929 c-myc基因的引物。

第二方面，本發明提供了一種PCR試劑盒，其包含第一方面的試劑。

第三方面，本發明提供了第一方面的試劑制備用于檢測人或動物中骨髓瘤細胞負荷的檢測劑的用途。

與現有技術相比，本發明無需對靶細胞進行各種標記，造價低，操作簡單，并且可以對腫瘤細胞進行定性和定量。

附圖說明