[發明專利]瑤藥白背三七中吡咯里西啶生物堿的含量測定方法

在審

• 申請號: 202210458617.2
• 申請日: 2022-04-28
• 公開（公告）號: CN114894927A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 朱雪妍;李立;羅軼;蔣湘;黃燕紅
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區食品藥品檢驗所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來光業

1.瑤藥白背三七中吡咯里西啶生物堿的含量測定方法，其特征在于，采用UPLC-MS/MS法進行同時測定白背三七中芝麻菜葉千里光堿氮氧化物、春千里光堿、春千里光堿氮氧化物、倒千里光堿、千里光菲靈堿、千里光寧堿和野百合堿7種吡咯里西啶生物堿的含量，具體包括如下步驟：

（1）混合對照品溶液的制備

精密稱取芝麻菜葉千里光堿的氮氧化物、春千里光堿、春千里光堿氮氧化物、倒千里光堿、千里光菲靈堿、千里光寧堿、野百合堿對照品適量，分別加甲醇配成質量濃度為10.256、10.368、10.154、9.985、10.280、9.887、10.065μg·mL^-1 的對照品儲備液；分別精密吸取各對照品儲備液1.0mL，置于同一20mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到質量濃度分別為0.5128、0.5184、0.5077、0.4992、0.5140、0.4944、0.5032μg·mL^-1的混合對照品溶液，備用；

（2）供試品溶液的制備

取白背三七粉末，過四號篩，2.0g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入0.05mol·L^-1硫酸溶液20mL超聲提取30分鐘，過濾，取續濾液10mL通過SPE-MCX固相萃取小柱，用甲醇10mL淋洗除雜，5% 氨水-甲醇溶液10mL洗脫，收集洗脫液并濃縮至1mL左右，用50% 甲醇定容至20mL量瓶中，過0.22μm微孔濾膜，取續濾液，即得；

（3）色譜質譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 SB-C18色譜柱，150 mm×3.0 mm，2.7μm；柱溫：40℃；流動相：0.1% 甲酸和5.0mmol·L^-1甲酸銨的水溶液（A）及0.1% 甲酸的甲醇（B），梯度洗脫：0～12 min，5%～30% B；12～13min，30%～90% B；13～16min，90% B；流速：0.3mL/min；進樣量為2μL；

質譜離子源采用ESI源，正離子，多反應監測模式，氣簾氣（CUR）流速20L/min，噴霧電壓（IS）5500V，離子源溫度（TEM）450℃；

（4）測定

分別精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液各2μL，注入超高效液相色譜與質譜聯用儀，在上述色譜質譜條件下進樣測定，記錄色譜圖，依據外標法計算芝麻菜葉千里光堿的氮氧化物、春千里光堿、春千里光堿氮氧化物、倒千里光堿、千里光菲靈堿、千里光寧堿和野百合堿的含量。

2.根據權利要求1所述的瑤藥白背三七中吡咯里西啶生物堿的含量測定方法，其特征在于，步驟（2）供試品溶液的制備中，所述超聲提取的功率為320 W，超聲波頻率為45 kHz。

3.根據權利要求1所述的瑤藥白背三七中吡咯里西啶生物堿的含量測定方法，其特征在于，步驟（2）供試品溶液的制備中，所述的SPE-MCX固相萃取小柱使用前先用甲醇5mL活化，0.05mol·L^-1硫酸溶液5mL平衡，棄去洗脫液。

4.根據權利要求1所述的瑤藥白背三七中吡咯里西啶生物堿的含量測定方法，其特征在于，步驟（3）色譜質譜條件中，芝麻菜葉千里光堿氮氧化物、春千里光堿、春千里光堿氮氧化物、倒千里光堿、千里光菲靈堿、千里光寧堿和野百合堿7種吡咯里西啶生物堿的質譜條件如下表所示：

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