[發明專利]一種提高腺病毒生產的WAYNE293 LVPRO細胞培養基添加物及制作方法

有效

• 申請號: 202210457724.3
• 申請日: 2022-04-27
• 公開（公告）號: CN114736846B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 潘洪輝;喻曉瑜;袁軍;胥文彥;謝國豪;吳帆
• 申請（專利權）人: 蘇州康天晟合生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種提高腺病毒生產的WAYNE293LVPRO細胞培養基添加物及其制作方法。其為胱氨基酸2?6g/L、天門冬酸雙肽2?3g/L和賴氨酸三肽2?3g/L。本發明的WAYNE293LVPRO細胞培養基添加物能夠顯著的提高WAYNE293LVPRO細胞的腺病毒生產能力。并且WAYNE293LVPRO細胞培養基添加物是低成本的無血清無動物來源培養基，對工藝優化與反應器放大，以滿足大量表達基因治療性病毒的需求，對于病毒藥物的產業化的意義是非常重大的。

技術領域：

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種提高腺病毒生產的WAYNE293?LVPRO細胞培養基及制作方法。

背景技術：

動物細胞表達的腺病毒藥物銷售額迅速增長，作為商業化生產腺病毒的核心技術之一的大規模動物細胞懸浮培養成為腺病毒藥物發展的新瓶頸。其中之一主要技術限制就是國內沒有自己的高效能商業化動物懸浮培養基，而SIGMA、Invitrogen、Hyclone和Lonza等國際知名培養基，每升高達上千元，且配方保密，不利于后續的培養工藝優化。故研制出自主品牌且低成本的無血清無動物來源培養基，對工藝優化與反應器放大，以滿足大量表達基因治療性病毒的需求，對于病毒藥物的產業化的意義是非常重大的。

市場病毒藥物70％以上都是由HEK203細胞宿主細胞表達。目前WAYNE293?LVPRO細胞沒有培養基添加劑專門設計用于HEK293細胞的生長和懸浮培養條件下病毒的表達。現希望發明一種新型WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物增加腺病毒的產量。

發明內容：

本發明的第一個目的是提供能夠顯著增加WAYNE293?LVPRO細胞腺病毒產量的提高腺病毒生產的WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物。

所述的提高腺病毒生產的WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物，其為胱氨基酸2-6g/L、天門冬酸雙肽2-3g/L和賴氨酸三肽2-3g/L。

優選，所述的提高腺病毒生產的WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物，其為胱氨基酸4g/L,天門冬酸雙肽2.5g/L和賴氨酸三肽2.5g/L。

本發明的第二個目的是提供提高腺病毒生產的WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物的制作方法，其是將各成分按其含量加入到水中，除菌制得。

本發明的WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物能夠顯著的提高WAYNE293?LVPRO細胞的腺病毒生產能力。并且WAYNE293?LVPRO細胞培養基添加物是低成本的無血清無動物來源培養基，對工藝優化與反應器放大，以滿足大量表達基因治療性病毒的需求，對于病毒藥物的產業化的意義是非常重大的。

具體實施方式：

以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。

實施例1：

1.商業化的AAV病毒載體質粒、包裝質粒和輔助質粒(均購自合肥賽海生物科技有限公司)，濃度大于1ug/ul，A260/280在1.7-1.8間方可。

2.以5×10⁵個/ml的細胞濃度接種WAYNE293?LVPRO細胞(其公開于申請號CN202110688920.7，發明名稱：一種適應無血清培養基環境的WAYNE293?LVPRO細胞及其應用的申請中，其保藏信息是：人胚胎腎細胞WAYNE?293于2021年5月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼：100101，保藏編號為：CGMCC?No.22348)，37℃，120rpm搖床培養4天后，WAYNE293?LVPRO細胞濃度達到5-10×10⁶個/ml。

3.做脂轉complex，按照以下比例混合