[發明專利]一種同時調節細胞表達產物的糖型和電荷異質性的方法

在審

• 申請號: 202210450376.7
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114990049A
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 黃峰;李剛;鄭子榮;田金寶;楊光
• 申請（專利權）人: 鼎康（武漢）生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 黃益澍

1.一種調節細胞表達產物的糖型和/或電荷異質性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：在細胞培養的過程中添加可以調節蛋白酸性峰和/或堿性峰的調節劑，其中，所述調節劑為DMSO和/或NH₄Cl。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述調節劑還可以調節糖型；和/或，所述細胞為CHO-K1細胞；優選地，所述糖型為半乳糖化糖型，所述CHO-K1細胞包括含GS基因的表達載體，并且所述GS基因下游插入了外源基因。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，

當調節劑為DMSO時，其濃度為1-5％；其中％為體積百分比；

當調節劑為NH₄Cl時，其濃度為20-55mM。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，

當調節劑為DMSO時，其濃度為2％-4％；

當調節劑為NH₄Cl時，其濃度為25-50mM。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，

當調節劑為DMSO和NH₄Cl時，其濃度分別為1-2％的DMSO和25-50mM的NH₄Cl；

優選地，當調節劑為DMSO和NH₄Cl時，其濃度分別為25mM NH₄Cl+1％DMSO或50mM NH₄Cl+2％DMSO。

6.如權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述調節劑還包括UMG；其中所述UMG包括濃度分別為24mM、48μM和120mM的尿苷、氯化錳和半乳糖；

優選地，當調節劑包括UMG時，所述調節劑為1-5％UMG+1-2％DMSO；

更優選地，所述調節劑為4％UMG+1％DMSO或4％UMG+2％DMSO。

7.如權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括：將所述細胞接種至適合細胞生長的培養基中，在第5、7、9、11天時添加調節劑。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，

當調節劑為DMSO時，在第5、7、9、11天時添加所述調節劑，優選在第7天時添加所述調節劑；

當調節劑為NH₄Cl時，在第5、7、9、11天時添加所述調節劑。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的培養條件為37℃、125rpm、80％濕度和5.5％CO₂；優選地，所述培養條件還包括所述培養基中葡萄糖的濃度為6-8g/L。

10.一種如權利要求1所述的調節劑在培養細胞中的應用。