[發(fā)明專利]3-甲氧基酪胺的檢測試劑及檢測方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210447727.9 | 申請日： | 2022-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN114609379A | 公開（公告）日： | 2022-06-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉功成;莊路陽;許君艷;牛自飛;王丹;劉念 | 申請（專利權(quán)）人： | 鄭州安圖生物工程股份有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/531 | 分類號： | G01N33/531;G01N33/535 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 溫可睿 |
| 地址： | 450016 河南省*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 甲氧基酪胺 檢測 試劑 方法 | ||
本發(fā)明涉及生化檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及3?甲氧基酪胺的檢測試劑及檢測方法。本發(fā)明提供的前處理試劑能夠快速對前處理樣品進行處理，首個結(jié)果檢測僅需要30min，之后每測試間隔18秒出結(jié)果，大幅提高檢測效率。并且該試劑對樣品的前處理質(zhì)量較高，從而使檢測結(jié)果具有更高的靈敏度和特異性以及重復性，大大提高臨床符合率。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生化檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及3-甲氧基酪胺的檢測試劑及檢測方法。
背景技術(shù)
嗜鉻細胞瘤和副神經(jīng)節(jié)瘤(pheochromocytoma and paraganglioma，PPGL)是繼發(fā)性高血壓的病因之一，近年來其患病率呈上升趨勢。3-甲氧酪胺(3-methoxytyramine，3-MT)能夠作為PPGL的檢測標志物，為PPGL的診斷和鑒別良、惡性提供一定的幫助。并且，3-MT被認為是識別嗜鉻細胞瘤有無轉(zhuǎn)移的重要標志。
目前3-MT的市場主流檢測方法主要包括高效液相色譜法(HPLC)、高效液相電化學聯(lián)用(HPLC-EDC)、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)等，但HPLC檢測時間長、成本高，不同實驗室條件差別大較難實現(xiàn)批量測定，酶聯(lián)免疫測定法準確性和再現(xiàn)性較差，且自動化程度低、易受環(huán)境影響，靈敏度較低。
磁性微球是一類球形復合材料，直徑為納米或微米級。具有大的比表面積、高分散穩(wěn)定性、超順磁性、功能基團、生物相容等特性，被廣泛應(yīng)用于細胞分離和提純、免疫檢測、核酸分析和免疫工程、作靶向釋藥的載體等領(lǐng)域。化學發(fā)光免疫分析是免疫反應(yīng)的酶作用于發(fā)光底物，使之發(fā)生化學反應(yīng)并釋放出大量的能量，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體。這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時，可同時發(fā)射出光子。利用發(fā)光信號檢測儀器即可測量出光量子產(chǎn)額，該光量子產(chǎn)額與樣品中的待測物質(zhì)的量成正比，由此可以建立標準曲線并計算樣品中待測物質(zhì)的含量。磁性微球可以作為固相支持物被廣泛應(yīng)用于化學發(fā)光免疫分析法中。
磁微粒化學發(fā)光免疫分析法具有準確性高、靈敏度高的特點，但該方法對于檢測樣品要求較高，血液或尿液樣品無法直接以磁微粒化學發(fā)光免疫分析法檢測其中的3-MT，而前處理的酰化過程過長無疑加大了檢測的時間成本。
發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供3-甲氧基酪胺的檢測試劑及檢測方法。
本發(fā)明提供的樣品前處理試劑組合，其包括：酸化液、衍生化試劑和酰化緩沖液，其中：
所述酸化液為鹽酸溶液或硫酸溶液；
所述衍生化試劑中包括酸酐或甲基-PEG4-NHS酯；
所述衍生化緩沖液選自Tris緩沖液、PBS緩沖液、碳酸緩沖液中任一種。
本發(fā)明所述酸化液為濃度為0.1mol/L～0.5mol/L的鹽酸溶液，pH值＜1。
一些實施例中，所述鹽酸溶液的濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液，pH值＜1。
或者本發(fā)明所述酸化液為濃度為0.1mol/L～0.5mol/L的硫酸溶液，pH值＜1。
一些實施例中，所述硫酸溶液的濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液，pH值＜1。
本發(fā)明嘗試以檸檬酸、硝酸、硫酸和鹽酸對樣品進行酸化處理，結(jié)果表明檸檬酸、硝酸的酸化效果不及硫酸和鹽酸。其中效果最好的是鹽酸，特別是0.2mol/L的鹽酸溶液。
本發(fā)明所述衍生化試劑為液態(tài)的酸酐。一些實施例中，所述酸酐為己酸酐或辛酸酐。
或者本發(fā)明所述的衍生化試劑為濃度為40mg/mL～200mg/mL的甲基-PEG4-NHS酯。
本發(fā)明對多種衍生化試劑進行嘗試，結(jié)果表明酸酐的衍生化效果優(yōu)于甲基-PEG4-NHS酯。酸酐中的己酸酐或辛酸酐的衍生化效果較好，其中己酸酐的效果優(yōu)于辛酸酐。
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