[發(fā)明專利]一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽、制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210447407.3
• 申請(qǐng)日: 2022-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN114835824B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王均;賀揚(yáng);覃川杰;謝碧文;王永明;張志勇;李銳;史慶超;文正勇;胡鵬;李華濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)江師范學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/81;A23K20/147;A23K50/80
• 代理公司: 成都正德明志知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51360
• 代理人: 萬(wàn)雪松

本發(fā)明提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽、制備方法及其應(yīng)用，本發(fā)明提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽，該雜合抗菌肽能夠解決瓦氏黃顙魚魚苗抗菌力差以及存活率低的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明還提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽的制備方法，該方法采用瓦氏黃顙魚頭腎組織中的抗菌肽Hepcidin和β?defensin為母肽進(jìn)行合成，該方法步驟簡(jiǎn)單、容易操作，方便瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽的批量生產(chǎn)。接著，本發(fā)明提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽在提高瓦氏黃顙魚抗菌力和存活率中的應(yīng)用，最后，本發(fā)明提供了一種提高瓦氏黃顙魚抗菌力和存活率的制劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽、制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗菌肽(antimicrobial?peptides,AMPs)是在外界條件刺激下，動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一類對(duì)抗外源性病原體侵襲的防御性活性肽類物質(zhì)，是動(dòng)物非特異性免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分，能夠通過(guò)“溶解性”破壞或“離子”造孔來(lái)防御多種細(xì)菌、真菌、病毒及其他病原生物的感染。近年來(lái)，抗菌肽作為一種新型的高效抗菌藥物，由于其具有分子量小、水溶性好、穩(wěn)定性強(qiáng)、耐酸堿、抗菌譜廣且作用機(jī)制特別，不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，成為新型抗生素替代品開發(fā)的良好候選資源。

雖然目前已經(jīng)有兩千多種抗菌肽被鑒定或研究，但是大多數(shù)天然抗菌肽都表現(xiàn)出活性較低、不穩(wěn)定、具有一定的細(xì)胞毒性和產(chǎn)量低等缺點(diǎn)。隨著對(duì)抗菌肽作用機(jī)制、分子結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系等研究的逐步深入，人們?cè)诎l(fā)掘新抗菌肽的同時(shí)，更注重尋找高效、廣譜、穩(wěn)定、低毒、肽鏈較短的抗菌肽，其中雜合肽即為一類這樣的新型抗菌肽。

瓦氏黃顙魚(學(xué)名：Pelteobagrus?vachelli)是鲿科、黃顙魚屬一種常見的淡水魚，由于其具有肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、生長(zhǎng)迅速和抗病力強(qiáng)等特點(diǎn)，受到廣大消費(fèi)者、養(yǎng)殖戶和科研工作者的青睞，逐漸成為一種用于遺傳育種、營(yíng)養(yǎng)飼料和疾病防控研究的模式試驗(yàn)魚類。然而隨著養(yǎng)殖密度的提高，養(yǎng)殖水環(huán)境惡化，導(dǎo)致瓦氏黃顙魚的疾病頻繁爆發(fā)，特別是細(xì)菌性疾病危害最大。因此，開展瓦氏黃顙魚抗菌肽的系統(tǒng)研究，對(duì)瓦氏黃顙魚抗病機(jī)制闡述、抗病新品種培育及其抗菌肽產(chǎn)品開發(fā)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽，該雜合抗菌肽能夠解決瓦氏黃顙魚魚苗抗菌力差以及存活率低的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽的制備方法，該方法采用瓦氏黃顙魚頭腎組織中的抗菌肽Hepcidin和β-defensin為母肽進(jìn)行合成，該方法步驟簡(jiǎn)單、容易操作，方便瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽的批量生產(chǎn)。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽在提高瓦氏黃顙魚抗菌力和存活率中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種提高瓦氏黃顙魚抗菌力和存活率的制劑。

首先，本發(fā)明提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽，該雜合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。該瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽能夠有效提高瓦氏黃顙魚對(duì)于病菌的抗病能力，從而提高瓦氏黃顙魚魚苗的存活率。

其次，本發(fā)明還提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽的制備方法，包括如下步驟：去掉瓦氏黃顙魚抗菌肽β-defencin的第1-20個(gè)氨基酸和第47-49個(gè)氨基酸、刪除第36位和第42位的半胱氨酸、將第23位的異亮氨酸替換為賴氨酸以及將第28位的谷氨酸替換為精氨酸，得到dcBD1，dcBD1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；刪除瓦氏黃顙魚抗菌肽Hepcidin的α螺旋兩端的多余序列并保留第8-17個(gè)氨基酸區(qū)段，得到dcHEP2，dcHEP2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；將dcBD1與dcHEP2組合，得到dcBD1-HEP2，即得到瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽。該方法通過(guò)條件優(yōu)化，獲得高產(chǎn)、無(wú)毒、高活性的雜合抗菌肽產(chǎn)物，此外該方法簡(jiǎn)單方便容易操作，能夠便于該瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽得到大批量生產(chǎn)。

接著，本發(fā)明還提供了一種瓦氏黃顙魚雜合抗菌肽在提高瓦氏黃顙魚抗菌力和存活率中的應(yīng)用。