[發明專利]一種三肽-29的生產工藝

有效

• 申請號: 202210445705.9
• 申請日: 2022-04-26
• 公開（公告）號: CN114702546B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 于更立;李江濤;劉聰;林志樂;李開慶;趙帥
• 申請（專利權）人: 山東濟肽生物科技有限公司
• 主分類號: C07K5/083
• 分類號: C07K5/083;C07K14/78;C07K1/02;C07K1/12;C07K1/06
• 代理公司: 山東智匯盛景知識產權代理有限公司 37321
• 代理人: 杜民持

本發明涉及一種三肽?29的生產工藝，屬于生物醫藥領域，采用依次合成Mca?Pro?OH、H?Gly?Pro?OH、Fmoc?Gly?Pro?OH、Fmoc?Gly?Pro?ONp、Fmoc?Gly?Pro?Hyp?OH，最后將所得Fmoc?Gly?Pro?Hyp?OH水解得到三肽?29的工藝路線，采用最小保護，六步反應就可以得到合格的產品，大幅度降低了生產周期，降低了生產成本。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種三肽-29的生產工藝。

背景技術

三肽-29即膠原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH是一種含有甘氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸的三肽，由于膠原三肽的分子量很小，因而能夠被人體充分吸收，與此同時，膠原三肽還能夠極有效的滲入角質層、真皮層和頭發根部細胞內，是目前分子量最小的，與皮膚膠原蛋白有相同的基本結構，無需分解，能夠被皮膚直接吸收，吸收率高。膠原三肽能促進真皮膠原蛋白生成，真表皮連接層再生，表皮再生和分化，廣泛應用于各種高級美容化妝品中，有保濕、滋養、亮膚、緊膚、防皺、修復的功能。

目前常規合成膠原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH采用如申請號為2017112641452的中國發明專利申請公開的三肽-29的液-固相合成方法，其所使用的原料Fmoc-Hyp(tBu)-OH價格較高，自主合成過程繁雜。具體分析來，該工藝路線使用固相合成，存在如下缺點：其一是原料都是使用Fmoc保護的氨基酸，原料價格昂貴，生產周期長，三廢排放量大，而且在固相反應過程中，原料至少使用2當量以上，這就造成原料成本大幅度增加，造成資源的浪費；其二是固相合成必須使用配套的、定制的反應器，該固相反應器成本較高，定制價格昂貴，最關鍵的是該固相反應器不能做到體積很大，這就造成使用該工藝生產H-Gly-Pro-Hyp-OH批產量低、產能低；其三是固相合成使用的樹脂價格昂貴，而且無法重復利用；其四是專利中使用液-固相合成方法，有機溶劑使用量巨大，與當今綠色化學、可持續發展理念不符；其五是專利中使用固相合成得到的是三肽-29的TFA(三氟乙酸)鹽，眾所周知，TFA(三氟乙酸)鹽是不能銷售的，因此該工藝不利于產業化。以上五點說明現有技術生產三肽-29成本高、三廢多、附加值低。

因此，簡單快捷、成本較低的合成方法和H-Hyp-OH保護策略研究對廣泛使用于化妝品的膠原三肽有重要意義。

發明內容

本發明針對現有技術中所存在的上述問題提供了一種三肽-29的生產工藝，其要解決技術問題在于：（1）避免固相合成所使用的Fmoc保護的氨基酸；（2）避免Hyp(羥脯氨酸)上的羥基的保護；（3）使生產工藝不受生產場地的限制，易于放大生產；（4）降低有機溶劑的使用量，減小三廢排量；（5）中間體易于生產以及后處理。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種三肽-29的生產工藝，其特征在于，以脯氨酸、氯乙酰氯、氨水、Fmoc-Cl、HONP（對硝基苯酚）、DIC（N,N'-二異丙基碳二亞胺）、羥脯氨酸為原料，首先脯氨酸與氯乙酰氯在堿性條件下反應制得中間體-1 Mca-Pro-OH，然后中間體-1與氨水反應制得中間體-2 H-Gly-Pro-OH，再將中間體-2與Fmoc-Cl在堿性條件下反應制得中間體-3 Fmoc-Gly-Pro-OH，中間體-3經與HONP、DIC反應制得中間體-4Fmoc-Gly-Pro-ONp，中間體-4再與羥脯氨酸反應制得中間體-5 Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，最后中間體-5經水解得到三肽-29 H-Gly-Pro-Hyp-OH。

上述反應的反應式如下：

進一步的，中間體-1的合成如下：向一容器中加入脯氨酸Pro、水、有機溶劑，保持溫度-5-0℃，向料液中滴加氯乙酰氯和有機溶劑的混合溶液，加料和滴加過程中保持體系pH在8.5-9.0，滴加過程中固體逐漸溶解，反應完后，保持溫度0-5度，調節料液pH為2.0±0.2，攪拌、抽濾，濾餅洗滌、干燥，得Mca-Pro-OH。