[發明專利]亞洲玉米螟腸道免疫關鍵基因OfPGRP6及其應用

在審

• 申請號: 202210442571.5
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114921470A
• 公開（公告）日: 2022-08-19
• 發明（設計）人: 沈東旭;梅香寒;喬沛彤;彭佩琳;李淳;趙巧玲
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C12N15/66;C07K14/435;A01N47/44;A01P7/04
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 徐澍

1.亞洲玉米螟腸道免疫調控的關鍵基因OfPGRP6，其特征在于，其編碼區序列，即CDS序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的亞洲玉米螟腸道免疫關鍵基因OfPGRP6，其特征在于，所述OfPGRP6基因編碼的蛋白質的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.基于權利要求1所述的亞洲玉米螟腸道免疫關鍵基因OfPGRP6的CDS序列的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1，設計引物序列

正向引物F：5'-TACATATGCACCCTACAAACAAATTGGC-3'，

反向引物R:5'-TACTCGAGATTTAATTGTGTAACAGC-3'，

步驟2，PCR擴增

以亞洲玉米螟的全蟲或組織的 cDNA 為模板進行擴增，PCR 反應條件為 ：94 ℃預變性3 min，然后94 ℃變性30 s、57℃退火30 s、72 ℃延伸30 s，共 30 個循環，最后72℃延伸 10 min ；瓊脂糖凝膠電泳分析擴增的PCR產物并通過膠回收試劑盒進行膠回收；

將回收后的PCR產物與pMD19-T載體連接，轉化DH5α感受態細胞，獲得陽性克隆后送往上海生工生物技術有限公司測序，測序結果表明OfPGRP6基因的CDS序列被成功克隆，得到含有如SEQ ID NO.1所示的T克隆。

4.一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒含有權利要求1所述的關鍵基因OfPGRP6的CDS序列。

5.一種重組載體，其特征在于，表達權利要求4所述的重組質粒。

6.根據權利要求5所述的重組載體的構建方法，其特征在于：以pET28a空載體,選用NcoⅠ和Xho Ⅰ為酶切位點，酶切位點后添加6×His標簽，將權利要求3中獲得的含有目的基因的T克隆和pET28a空質粒分別用Nco Ⅰ和Xho Ⅰ進行雙酶切，分別回收目的片段，以T4連接酶連接并轉化BL21感受態細胞，獲得陽性克隆后送往上海生工生物技術有限公司測序，獲得正確的pET28a-H is-OfPGRP6的重組質粒。

7.基于權利要求1所述的關鍵基因OfPGRP6或權利要求5的重組載體在制備用于鱗翅目害蟲防治的藥物上的應用。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述藥物包括化學藥物或靶向生物藥物。