[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210438117.2
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114736814A
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 嘉曉勤;何猛;趙天佑
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/80;C12N15/54;C12P17/06;C12R1/645
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

本發(fā)明提供了一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲—紅色紅曲菌（Monascus ruber）浙工紅曲4號，由紅曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因（pksCT）和紅曲色素合成基因（MpigF和MpigH）并去除外源基因后獲得。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供了一種高產(chǎn)monacolin k且不含外源基因的重組紅曲菌，該重組紅色紅曲菌在大米固體培養(yǎng)基中發(fā)酵30d后monacolin k的產(chǎn)量相對于紅曲菌AS3.549提高了15.09%，為工業(yè)上紅曲菌種改良提供了新的途徑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于發(fā)酵工程與生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲菌及其構(gòu)建方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

紅曲菌是我國重要的食用和藥用微生物，可以產(chǎn)生多種天然產(chǎn)物，其中monacolink是膽固醇生物合成中的關(guān)鍵酶HMG-CoA還原酶的競爭性抑制劑，是目前治療高血脂癥最有效的藥物之一，對心絞痛患者和心肌梗死患者也有一定的治療效果。野生型紅曲菌的monacolin k產(chǎn)量低，規(guī)模化生產(chǎn)成本較高。一些學(xué)者通過對紅曲菌monacolin k合成基因簇中mok A、mok B、mokC、mok D、mok E、mok F、mok G、mok H、mok I等基因進(jìn)行增強(qiáng)表達(dá)，可以提高monacolin k的產(chǎn)量。但敲除紅曲菌中的某些基因，如紅曲色素合成的聚酮合酶基因MpigF和MpigH，桔霉素合成的聚酮合酶基因pksCT等，是否會影響moncolin k產(chǎn)量，尚未見報(bào)道。

構(gòu)建不含外源篩選基因的重組紅曲菌需要利用誘導(dǎo)型啟動子，以消除外源基因片段。目前，關(guān)于紅曲菌中可以使用的誘導(dǎo)型啟動子的報(bào)道非常有限，僅在申請?zhí)?02011553310.8的專利中，利用來源于里氏木霉的木糖誘導(dǎo)啟動子xyn1控制Cre基因表達(dá)。但紅曲菌中缺少xyn1啟動子所需的激活轉(zhuǎn)錄因子xyr1，使得xyn1啟動子在紅曲菌中的誘導(dǎo)效率不高。因此，需要探索更高效的誘導(dǎo)型啟動子以提高紅曲菌遺傳轉(zhuǎn)化效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是解決紅曲菌monacolin k產(chǎn)量較低、克服現(xiàn)有紅曲菌基因組改造技術(shù)的不足，提供一株monacolin k高產(chǎn)且外源篩選基因清除的重組紅曲菌(Monascusruber)。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲菌——紅曲菌BZ1，分類名稱為：Monascus ruber，由紅曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因pksCT后獲得。

一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲菌——紅曲菌BZ2，分類名稱為：Monascus ruber，由紅曲菌AS3.549基因敲除桔霉素合成基因pksCT和紅曲色素合成基因MpigF后獲得。

一株高產(chǎn)monacolin k的重組紅曲菌——紅色紅曲菌浙工紅曲4號，分類名稱為：Monascus ruber，由紅曲菌AS3.549（源自中國科學(xué)院微生物研究所）基因敲除桔霉素合成基因pksCT和紅曲色素合成基因MpigH和MpigF，并去除外源基因后獲得。