[發明專利]一種肉毒毒素特異性底物肽、檢測試劑盒和檢測方法

有效

• 申請號: 202210436869.5
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114539362B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 肖迪;李天一;王磊
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;G01N27/64;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及分析檢測技術領域，具體涉及一種肉毒毒素特異性底物肽、檢測試劑盒和檢測方法。本發明提供肉毒毒素特異性底物肽，所述底物肽為氨基酸序列如SEQ ID NO.1?4所示的多肽中的一種或多種。利用該特異性底物肽結合其經肉毒毒素切割產生的血清型特異性目的肽段，能夠實現較為特異、靈敏、準確的肉毒毒素及其血清型鑒定。本發明還提供了基于該特異性底物肽的檢測試劑盒以及檢測方法，利用該試劑盒和方法能夠快速、高通量、靈敏、準確地進行肉毒毒素及其血清型鑒定，為肉毒毒素檢測提供技術支撐。

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，具體涉及一種肉毒毒素特異性底物肽、檢測試劑盒和檢測方法。

背景技術

肉毒毒素（肉毒神經毒素）是由肉毒梭狀芽孢桿菌產生的一種已知對人類毒性最強的天然蛋白質毒素，對人的半數致死量為0.1-1.0ng/kg。肉毒毒素共分為A、B、C、D、E、F、G七個血清型，其中A、B、E、F型對人類有毒害作用，C、D型能引起動物中毒，G型很少見。肉毒毒素A、B兩個型別在臨床上廣泛用于神經內科、整形外科、康復科等多領域。肉毒梭菌中毒可造成食源性疫情發生。肉毒毒素血清型的鑒別、質量控制在醫療、疫情防控領域均具有非常重要的作用。

目前，小鼠動物實驗仍是肉毒毒素檢測的國標方法，但該方法操作繁瑣、結果變異系數大、試驗周期長，動物需求量大、成本高，因此，需要尋找動物實驗替代的方法，相關研究主要從免疫學、細胞學、質譜法等方面開展。目前商業化的肉毒毒素檢測試劑盒僅有A型肉毒毒素檢測ELISA試劑盒。因此，建立肉毒毒素快速、靈敏的鑒定、分型方法具有極其重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種肉毒毒素特異性底物肽、檢測試劑盒和檢測方法。

本發明的主要構思如下：具有活性（毒性）的肉毒毒素可以作為酶切割肽段的特異位點，根據不同血清型的肉毒毒素特異性切割的位點不同，本發明設計了針對A、B、E、F血清型肉毒毒素特異性的底物肽段，該肽段在被樣本中有活性的肉毒毒素特異性切割后會形成兩條新的型別特異性目的肽段，通過質譜檢測這兩條目標肽段即可判斷樣本中是否有肉毒毒素并確定血清型。

具體地，本發明提供以下技術方案：

第一方面，本發明提供肉毒毒素特異性底物肽，所述底物肽為氨基酸序列如SEQID NO.1-4所示的多肽中的一種或多種，其中，SEQ ID NO.1所示序列中，Xaa代表正亮氨酸，SEQ ID NO.3所示序列中Xaa代表高精氨酸。

上述底物肽中，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的底物肽為A型肉毒毒素特異性底物肽，能夠被A型肉毒毒素特異性、高效切割并產生兩條特征性產物肽，且不會被B、E和F型肉毒毒素切割。

氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的底物肽為B型肉毒毒素特異性底物肽，能夠被B型肉毒毒素特異性、高效切割并產生兩條特征性產物肽，且不會被A、E和F型肉毒毒素切割。

氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的底物肽為E型肉毒毒素特異性底物肽，能夠被E型肉毒毒素特異性、高效切割并產生兩條特征性產物肽，且不會被A、B和F型肉毒毒素切割。

氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的底物肽為F型肉毒毒素特異性底物肽，能夠被F型肉毒毒素特異性、高效切割并產生兩條特征性產物肽，且不會被A、B、E型肉毒毒素切割。

上述底物肽的N端和/或C端還可包含乙酰基、氨基的修飾。

在本發明的一些實施方式中，本發明提供的肉毒毒素特異性底物肽為以下多肽：

A型：Acetyl-RGSNKKPIDAGNQRATRXLGGR-NH₂；其中，X代表正亮氨酸；

B型：LSELDDRAADLQAGASQFESSAAKLKRKYWWKNLK；