[發明專利]一種腫瘤干細胞向神經元方向分化方法

有效

• 申請號: 202210436760.1
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114525250B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 肖海蓉;劉慶喜;魏卿;房帥
• 申請（專利權）人: 深圳博雅感知藥業有限公司
• 主分類號: C12N5/0793
• 分類號: C12N5/0793
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 馬云云

1.一種腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

S1、腫瘤干細胞獲取；

S2、腫瘤干細胞向神經元誘導分化；

S21、將腫瘤干細胞接種在分化培養基中培養3-7天，中間每2天換液1次，其中分化培養基為包含FBS、MEM-100 × 、青鏈霉素100 × 、全反式維甲酸ATRA和姜黃素的DMEM/F12完全培養基；

S22、將分化后的細胞導入神經元維持培養基中繼續培養7-14天，神經元維持培養基為包含BDNF、NGF、MEM-100 × 、青鏈霉素100 × 和B27-50 × 的Neurobasal Medium A完全培養基；

所述腫瘤干細胞采用膠質瘤細胞系U-118MG；

ATRA的用量為1μM，姜黃素的用量為0.5μM；

步驟S1具體包括如下步驟：

1）膠質瘤細胞系U-118MG干性培養；

將U-118MG細胞接種在腫瘤干細胞培養基中，培養3-5天，腫瘤干細胞培養基為包含1-40ng/ml的bFGF、1-20ng/ml的EGF、0.5-4%的B27-50 × 、0.1-0.4%青鏈霉素100 × 的無血清DMEM/F12完全培養基；

2）免疫磁珠分選；

3）分選后差速貼壁純化；

4）腫瘤干快速擴增。

2.根據權利要求1所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：分化培養基中FBS的體積分數為1%-8%，MEM-100 × 的體積分數為0.5%-2%，青鏈霉素100 × 的體積分數為0.1-0.4%。

3.根據權利要求2所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：每100mL分化培養基中FBS的用量為5mL，MEM-100 × 的用量為1mL，青鏈霉素100 × 的用量為200μL。

4.根據權利要求1所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：神經元維持培養基中BDNF的濃度為10ng/mL-80ng/mL，NGF的濃度為5ng/mL-40ng/mL，MEM-100 × 的體積分數為0.5%-2%，青鏈霉素100 × 的體積分數為0.1-0.4%，B27-50 × 的體積分數為0.5%-4%。

5.根據權利要求4所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：每100mL神經元維持培養基中BDNF的濃度為50ng/mL，NGF的濃度為10ng/mL，MEM-100 × 的用量為1mL，青鏈霉素100 × 的用量為200μL，B27-50 × 的用量為2mL。

6.根據權利要求1所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：在進行S2步驟之前先將得到的腫瘤干細胞使用胰酶消化得到單細胞。

7.根據權利要求1所述的腫瘤干細胞向神經元方向分化方法，其特征在于：步驟S21的培養條件為：37℃、5% CO₂培養箱中培養。