[發明專利]一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法

有效

• 申請號: 202210436132.3
• 申請日: 2022-04-25
• 公開（公告）號: CN114752701B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 楊宙;黃仁良;沈顯華;韓瑞才;朱珊;湯國平
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院水稻研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

1.一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、針對控制菌根共生效率基因OsCERK1啟動子區域的序列特征設計分子標記；

步驟二、設計引物GPC5-F和引物GPC5-R，并利用該組引物對樣品目標片段進行PCR擴增，獲得樣品的擴增產物；

步驟三、使用3％的瓊脂糖凝膠對擴增產物進行電泳檢測，并根據產物片段長度讀取OsCERK1的基因型；

步驟四、將OsCERK1^DY基因供體親本與秈稻分別進行雜交、回交和自交，利用標記對各世代單株進行檢測，篩選出OsCERK1^DY基因純合的穩定株系。

2.根據權利要求1所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述步驟一中的分子標記位于水稻第8號染色體上OsCERK1基因啟動子區域內，所述步驟四中的秈稻在OsCERK1基因上游652bp位置插入一段47bp的序列。

3.根據權利要求1所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述步驟二中所用引物GPC5-F核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，位于OsCERK1^DY基因上游第718bp-699bp位置，引物GPC5-R核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，位于OsCERK1^DY基因上游第469bp-489bp位置。

4.根據權利要求1所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述步驟四中OsCERK1^DY基因的純合樣品擴增產物為250bp條帶，秈稻型樣品為297bp條帶，獲得的雜合型樣品同時出現250bp和297bp條帶。

5.根據權利要求1所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述步驟三中電泳檢測操作具體為，先以0.5×TBE作為電泳緩沖液，取100ml加入至3g的瓊脂糖中，煮沸使瓊脂糖完全融化，凝膠自然冷卻3min后倒入制膠槽中并插入梳齒，待凝膠完全冷卻形成3％瓊脂糖凝膠后拔出梳齒；每個擴增樣品取10μl點樣電泳，電泳電壓為150V，時長為1h；電泳完成后用UVP凝膠成像系統即可觀察結果。

6.根據權利要求1所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述步驟四中雜交、回交和自交具體包括

S1、以含有OsCERK1^DY基因的水稻單片段代換系CSSL-DY為供體親本，與作為受體親本的秈稻材料雜交，獲得16個F₁代單株，并進行雜合型分子標記檢測；

S2、以雜交F₁代為父本與秈稻材料回交，對BC₁F₁代單株進行分子標記檢測，獲得含有OsCERK1^DY基因的雜合型單株；

S3、以雜合型BC₁F₁單株為父本與秈稻材料再次回交，對BC₂F₁代單株進行分子標記檢測，獲得13個BC₂F₁雜合型單株；

S4、用13個BC₂F₁雜合型單株自交收種，然后種植BC₂F₂群體，并用分子標記從每個群體中篩選出3個OsCERK1^DY基因純合的單株；

S5、用篩選出的OsCERK1^DY基因純合的單株進行自交，收種后種植BC₂F₃純合株系；

S6、對BC₂F₃株系的農藝性狀進行考察，獲得表現穩定的菌根高效共生秈稻品系。

7.根據權利要求6所述的一種培育菌根高效共生秈型水稻的方法，其特征在于：所述S1中雜合型單株分子標記檢測結果全部為雜合型，所述S2中分子標記檢測結果含有OsCERK1^DY基因的雜合型單株有8個，所述S6中最終獲得了5份表現穩定的菌根高效共生秈稻品系，所述S1-S4中的分子標記檢測均使用引物GPC5-F和引物GPC5-R進行擴增。