[發(fā)明專利]一種腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210435326.1
• 申請日: 2022-04-24
• 公開（公告）號: CN114778736A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設計）人: 尹雪;焦陽;林永強;薛菲;許麗麗;穆向榮;徐興燕;于鳳蕊
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 濟南知來知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 37276
• 代理人: 曹麗

1.一種腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：包括以下步驟：

供試品溶液的制備：將供試品粉末水洗，留殘渣；向藥渣中加入變性緩沖液和二硫蘇糖醇溶液，反應溶解，再加入碘代乙酰胺溶液避光反應；將反應后的混合液置于超濾離心管中作離心處理；向超濾膜上方的截留物中加入胰蛋白酶溶液；再次離心，鹿茸多肽穿過超濾膜轉(zhuǎn)移至膜下而被收集，用于儀器分析；

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測。

2.如權(quán)利要求1所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：所述變性緩沖溶液中，各組分的濃度為：573.1g/L鹽酸胍，12.1g/L三羥甲基氨基甲烷，0.734g/L乙二胺四乙酸，pH 8.0。

3.如權(quán)利要求1所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：在75-85℃下進行反應。

4.如權(quán)利要求1所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：色譜條件如下：流速0.3ml/min，流動相A為0.1％甲酸乙腈，溶液B為0.1％甲酸溶液，進行梯度洗脫，0～25min流動相A(％)3→20，流動相B(％)97→80，25～40min流動相A(％)20→50，流動相B(％)80→50。

5.如權(quán)利要求4所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：色譜柱BEH C₁₈(2.1×100mm，1.7μm)。

6.如權(quán)利要求1所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：質(zhì)譜條件如下：采用質(zhì)譜檢測器，電噴霧正離子模式(ESI⁺)，進行多反應監(jiān)測(MRM)，檢測離子對如下：母離子605.0，子離子1 169.1，子離子2 275.1。

7.如權(quán)利要求1所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：所述供試品溶液制備的具體方法如下：

取腦靈素片，除去包衣，研細，稱定；或取腦靈素膠囊，研細，稱定，置錐形瓶中，加水，超聲處理，離心，棄去上清液，離心后的殘渣，加無水乙醇，搖散，超聲處理，離心，棄去上清液，殘渣揮干，加入變性緩沖液，DTT溶液，搖勻，保溫處理過夜，取出放冷至室溫，離心，上清液加入IAA溶液，避光反應后混勻，離心；取上清液加入超濾膜上方，離心，再加入碳酸氫銨溶液，離心，向膜上殘留溶液中加入碳酸氫銨溶液和牛胰蛋白酶溶液，混勻，酶解，更換套管，離心，取下層套管中溶液作為供試品溶液。

8.如權(quán)利要求7所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：所述離心轉(zhuǎn)速為每分鐘6000轉(zhuǎn)。

9.如權(quán)利要求7所述的腦靈素制劑中微量鹿茸多肽的鑒別方法，其特征是：上清液加入超濾膜上方，12000rpm離心15分鐘。

10.權(quán)利要求1-9任一所述鑒別方法在鹿茸物種鑒別中的應用。