[發(fā)明專利]基因工程修飾的IL2細(xì)胞因子的重組載體、宿主細(xì)胞及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210430999.8
• 申請(qǐng)日: 2022-04-22
• 公開（公告）號(hào): CN114875069B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧洪新;熊旗;魏于全
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/867
• 分類號(hào): C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;C12N5/0783;A61K35/15;A61K35/17;A61K38/20;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 重慶樂泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50221
• 代理人: 林慰敏

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種基因工程修飾的IL2細(xì)胞因子的重組載體、宿主細(xì)胞及其用途。針對(duì)過繼性細(xì)胞治療中NK細(xì)胞在體內(nèi)存活周期短的問題，本發(fā)明為了提高NK細(xì)胞在體內(nèi)的存活時(shí)間，提供了一種基因工程修飾的IL2細(xì)胞因子的重組載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供了上述重組載體和宿主細(xì)胞導(dǎo)入免疫細(xì)胞中延長(zhǎng)免疫細(xì)胞存活時(shí)間和增強(qiáng)免疫細(xì)胞殺傷活性的用途。本發(fā)明通過基因工程修飾獲得一種重組載體，可以維持NK細(xì)胞在體內(nèi)和體外的長(zhǎng)期存活，還能增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷活性，對(duì)腫瘤的預(yù)防和治療具有重要的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種基因工程修飾的IL2細(xì)胞因子的重組載體、宿主細(xì)胞及其用途。

背景技術(shù)

NK細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)中具有自然殺傷活性的細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，在機(jī)體抗病毒和抗腫瘤反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。研究顯示，當(dāng)人的免疫系統(tǒng)中NK細(xì)胞缺陷時(shí)，癌癥的發(fā)病率更高而且預(yù)后更差。在腫瘤患者中，NK細(xì)胞浸潤(rùn)至腫瘤組織的程度也與患者的預(yù)后密切相關(guān)。與T細(xì)胞不同的是，NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞依賴于其細(xì)胞膜上激活性受體與抑制性受體的動(dòng)態(tài)平衡，不需要抗原的提前致敏且無(wú)MHC分子的限制。NK細(xì)胞不僅具有腫瘤細(xì)胞殺傷功能，而且對(duì)先天免疫和獲得性免疫的塑造具有重要作用。在臨床前研究和臨床研究中，過繼性NK細(xì)胞治療是細(xì)胞治療領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。然而NK細(xì)胞在體內(nèi)存活周期短，該特性賦予了NK細(xì)胞一定的安全屬性，但也限制了NK細(xì)胞治療的療效。因此如何安全高效延長(zhǎng)NK細(xì)胞的體內(nèi)存活周期是NK細(xì)胞治療亟待解決的關(guān)鍵問題。

目前臨床上常使用IL2和IL15等細(xì)胞因子延長(zhǎng)NK細(xì)胞在體內(nèi)的存活時(shí)間并改善NK細(xì)胞的治療效果。盡管細(xì)胞因子可以延長(zhǎng)NK細(xì)胞在體內(nèi)存活時(shí)間，但是細(xì)胞因子支持治療也可能帶來相應(yīng)的副作用。已證實(shí)，系統(tǒng)性IL2治療會(huì)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的激活，以及帶來嚴(yán)重血管滲漏綜合癥和神經(jīng)毒性等副作用。而系統(tǒng)性給與IL15治療主要影響NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞和CD8記憶T細(xì)胞，但I(xiàn)L15會(huì)以劑量依賴的方式引發(fā)低血壓和血小板減少等癥狀，并會(huì)導(dǎo)致中性白細(xì)胞的減少。相比于IL2，IL15是一個(gè)更安全的選擇。但是IL15帶來的系統(tǒng)性毒性仍然不可忽略。對(duì)天然細(xì)胞因子的定向改造是克服細(xì)胞因子系統(tǒng)性副作用的一種有效技術(shù)路線。為了降低IL2的系統(tǒng)性毒性，目前研究進(jìn)展中有四種IL2改造策略，分別是IL2突變體、PGE修飾的IL2、IL2免疫復(fù)合體和IL2-可溶性CD25融合蛋白。

事實(shí)上，IL2受體通常具有三種亞型，高親和力IL2受體復(fù)合物由IL2Rα、IL2Rβ和IL2Rγ組成，中親和力IL2受體由IL2Rβ和IL2Rγ組成，低親和力IL2受體由IL2Rα組成。其中Treg細(xì)胞表達(dá)高親和力IL2受體，因此易受IL2活化以及引發(fā)副反應(yīng)。現(xiàn)有的4種IL2改造策略可以一定程度上可以降低IL2對(duì)IL2Rα的親和力，從而降低了IL2對(duì)Treg細(xì)胞的活化效應(yīng)。然而IL2Rβ和IL2Rγ廣泛表達(dá)于各種淋巴細(xì)胞亞群，包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，現(xiàn)有的系統(tǒng)性給藥改造后的IL2不具備細(xì)胞特異性，因此可能導(dǎo)致廣泛的免疫活化，增加了自身免疫疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上可知，如何發(fā)揮IL2生物學(xué)活性來延長(zhǎng)NK細(xì)胞在體內(nèi)的存活時(shí)間，同時(shí)特異性激活特定細(xì)胞亞群是目前亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：如何發(fā)揮IL2生物學(xué)活性來延長(zhǎng)NK細(xì)胞在體內(nèi)的存活時(shí)間，同時(shí)特異性激活特定細(xì)胞亞群。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案為：提供了一種表達(dá)框架，從5’到3’依次為：IL2的基因-連接肽的基因-IL2Rα的基因。

其中，上述表達(dá)框架中，所述的IL2的基因?yàn)槿薎L2的基因。

其中，上述表達(dá)框架中，所述IL2的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；所述連接肽的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示；IL2Rα的基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

進(jìn)一步的，所述的人IL2細(xì)胞因子氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1所示：