[發明專利]一種評估鎘暴露水平的生物標志物及其應用

在審

• 申請號: 202210427166.6
• 申請日: 2022-04-21
• 公開（公告）號: CN114858950A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 皮會豐;鄧平;范騰飛;楊露;羅燕;張濤;余爭平
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學
• 主分類號: G01N30/04
• 分類號: G01N30/04;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/86;G16B40/00
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 陳雍

1.一種評估鎘暴露水平的生物標志物，其特征在于：其為假尿苷。

2.根據權利要求1所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物，其特征在于：其在尿液中的參考值為0.06835μg/ml。

3.根據權利要求1或2所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述鎘暴露診斷系統用于檢測樣品中的假尿苷。

4.根據權利要求3所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述樣品為尿液。

5.根據權利要求4所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述鎘暴露診斷系統包括氣相色譜-質譜聯用設備和第一預處理試劑，或者所述鎘暴露診斷系統包括液相色譜-質譜聯用設備和第二預處理試劑。

6.根據權利要求5所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：氣相色譜-質譜聯用設備的氣相色譜條件為：色譜柱采用DB-5MS毛細管柱，色譜柱規格為30m×0.25mm×0.25μm；載氣為氦氣，流速為1.0mL/min；進樣口的溫度為260℃；進樣量為1μL，且不分流進樣，溶劑延遲5min；

氣相色譜-質譜聯用設備的柱溫箱的升溫程序為：初始溫度為60℃，保持0.5min；以8℃/min的速度升溫至125℃；以8℃/min的速度升溫至210℃；以15℃/min的速度升溫至270℃；以20℃/min的速度升溫至305℃，再保持5min；

氣相色譜-質譜聯用設備的質譜條件為：采用電子轟擊離子源；離子源溫度為230℃，四級桿溫度為150℃，電子能量為70eV；掃描方式為全掃描模式，質量掃描范圍為50-500m/z。

7.根據權利要求6所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述第一預處理試劑包括脲酶溶液、甲醇-乙腈混合溶液、甲氧胺鹽酸鹽的吡啶溶液、BSTFA衍生化試劑和正己烷；

使用預處理試劑處理尿液的方法為：在尿液中加入脲酶溶液，經酶解處理后，再加入甲醇-乙腈混合溶液；經過震蕩、靜置和揮發有機溶劑后，加入甲氧胺鹽酸鹽的吡啶溶液進行肟化處理；然后再加入BSTFA衍生化試劑和正己烷，經震蕩和反應后獲得待檢測樣本；

所述脲酶溶液中脲酶的濃度為30U/10μL；所述甲醇-乙腈混合溶液的甲醇和乙腈的體積比為2:1；甲氧胺鹽酸鹽的吡啶溶液中甲氧胺鹽酸鹽的濃度為15mg/mL；BSTFA衍生化試劑中含有體積分數為1％的TMCS氯三甲基硅烷。

8.根據權利要求5所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述液相色譜-質譜聯用設備的色譜條件為：

色譜柱：Welch Ultimate XB-C8，150mm×4.6mm×5μm；流速：0.8mL/min；流動相包括水相和有機相，水相為體積百分數為0.1％的甲酸溶液，有機相為甲醇；洗針液：甲醇；柱溫箱溫度：40℃；洗脫方式為梯度洗脫。

9.根據權利要求8所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述液相色譜-質譜聯用設備的質譜條件為：離子源：電噴霧電離源；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：選擇反應監測；電噴霧電壓：+4000V；毛細管溫度：350℃；鞘氣：氮氣，65Arb；輔助氣：氮氣，20Arb；碰撞氣：氮氣；數據采集時間：5.00min；

離子對包括質荷比為243.15m/z的母離子、質荷比為109.973m/z的子離子、質荷比為153.090m/z的子離子、質荷比為183.017m/z的子離子；碰撞電壓為26V、16V和17V。

10.根據權利要求9所述的一種評估鎘暴露水平的生物標志物在構建鎘暴露診斷系統中的應用，其特征在于：所述第二預處理試劑為甲醇。