[發明專利]一株在低糖環境下生產透明質酸的馬鏈球菌獸疫亞種及其應用

有效

• 申請號: 202210418689.4
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN114806938B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 王騰飛;陶澤坤;袁海波;劉洪玲;黃迪;蔣藝
• 申請（專利權）人: 齊魯工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12P19/26;C12R1/46
• 代理公司: 濟南竹森知識產權代理事務所(普通合伙) 37270
• 代理人: 朱洪菊

1.一株馬鏈球菌獸疫亞種(Streptococcus?equi?subsp.zooepidemicus)WTF101，于2022年1月10日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號，保藏編號為CCTCC?NO：M?2022051。

2.如權利要求1所述的馬鏈球菌獸疫亞種WTF101，其特征在于，所述馬鏈球菌獸疫亞種WTF101的16s?rRNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.權利要求1所述的馬鏈球菌獸疫亞種WTF101在低糖環境下生產透明質酸中的應用。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述低糖環境下生產透明質酸是指在低糖發酵培養基中生產透明質酸，所述低糖發酵培養基的組分為：3-5％葡萄糖、1-2％蛋白胨、0.5-1.0％酵母浸粉、0.1-0.5％三水磷酸氫二鉀、0.05-0.2％七水硫酸鎂，并在發酵過程中補加葡萄糖，保證葡萄糖濃度維持在1.0-2.6％之間，最終發酵培養基的葡萄糖總濃度為7.2-8.0％。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述低糖發酵培養基的組分為：4％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.6％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氫二鉀、0.05％七水硫酸鎂，并在發酵過程中補加葡萄糖，保證葡萄糖濃度維持在1.0-2.6％之間，最終發酵培養基的葡萄糖總濃度為7.2％。

6.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述生產透明質酸的產量為9.5-12.2g/L，發酵液的粘度為52500-74000mPa·s，原料與產物之間的轉化效率為13.2-16.9％，發酵周期為16-20h。

7.一種利用權利要求1所述的馬鏈球菌獸疫亞種WTF101生產透明質酸的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)種子活化：將馬鏈球菌獸疫亞種WTF101接種至種子培養基中，150-220rpm、36-37℃活化至OD₆₀₀為1.0-1.5，得一級種子液；

(2)種子擴培：將步驟(1)得到的一級種子液按照1-5％體積百分比接種量接種至種子培養基中，150-220rpm、36-37℃培養至OD₆₀₀為1.0-1.5，得二級種子液；

(3)發酵：將步驟(2)得到的二級種子液接種至發酵培養基中，接種量為5-10％體積百分比，設定發酵溫度36-37℃，pH＝7.0，轉速200-500rpm，通風比1:1，溶氧大于30％，維持并執行以上發酵條件，待發酵液中殘糖低于2g/L時即可結束發酵，放罐提純；

(4)提純：將步驟(3)得到的發酵液經提取、純化、精制后得透明質酸成品。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(1)和步驟(2)中所述種子培養基的組分為：0.5％葡萄糖、1％蛋白胨、0.4％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氫二鉀、0.05％七水硫酸鎂、pH＝7.0。

9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述發酵培養基的組分為：3-5％葡萄糖、1-2％蛋白胨、0.5-1.0％酵母浸粉、0.1-0.5％三水磷酸氫二鉀、0.05-0.2％七水硫酸鎂，并在發酵過程中補加葡萄糖，保證葡萄糖濃度維持在1.0-2.6％之間，最終發酵培養基的葡萄糖總濃度為7.2-8.0％。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述發酵培養基的組分為：4％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.6％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氫二鉀、0.05％七水硫酸鎂，并在發酵過程中補加葡萄糖，保證葡萄糖濃度維持在1.0-2.6％之間，最終發酵培養基的葡萄糖總濃度為7.2％。