[發(fā)明專利]外泌體miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作為肝癌診斷標(biāo)志物的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210418007.X
• 申請(qǐng)日: 2022-04-20
• 公開（公告）號(hào): CN114657251A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李偉華;陳德喜;李傳云;李榕;陳靜;羅淑敏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院;北京市肝病研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12N15/113;C12N15/10
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙) 11130
• 代理人: 王為

本發(fā)明涉及血漿外泌體miRNA?485?3p和miRNA?885?5p作為肝癌診斷標(biāo)志物的應(yīng)用，其中所述的外泌體中miRNA?485?3p的序列為5’?AGAGAGGAGAGCCGUGUAUGAC?3’；miRNA?885?5p的序列為5’?UCCAUUACACUACCCUGCCUCU?3’。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及血漿外泌體miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作為肝癌診斷標(biāo)志物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在所有惡性腫瘤中位居第四位，而病死率高居第三位，其中肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占所有原發(fā)性肝癌的85％～90％。HCC預(yù)后不良，主要?dú)w咎于在其隱匿的發(fā)病過程，因此很多患者在首診時(shí)即為中晚期，失去根治性治療機(jī)會(huì)。而AFP作為主要的血清學(xué)標(biāo)志物，其標(biāo)志其敏感度為40-65％，特異性為76-90％，有近1/3的肝癌患者AFP陰性。所以AFP作為早期診斷指標(biāo)并不理想。因此尋找敏感性高的HCC血清學(xué)標(biāo)志物，不僅在肝癌早期診斷中發(fā)揮著重要作用，同時(shí)對(duì)于早期HCC根治術(shù)后患者病情監(jiān)測、復(fù)發(fā)預(yù)測以及預(yù)后評(píng)估等均有重要意義。

外泌體由細(xì)胞分泌釋放出來，在血液等體液內(nèi)傳播，是細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)。腫瘤外泌體攜帶來源于腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)信息(蛋白、DNA和microRNA等)，其內(nèi)容物的濃度與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力及腫瘤微環(huán)境相關(guān)，通過分析外泌體的表面標(biāo)記或內(nèi)部成分可以直接獲得癌細(xì)胞的基本信息。由于外泌體有脂質(zhì)膜保護(hù)，其內(nèi)容物如DNA、RNA和蛋白質(zhì)不易被降解破壞，使得無論新鮮的還是長期保存的樣本皆可用于分析。更重要的是，外泌體可以從眾多體液中獲得(血液、尿液等)，這使得外泌體檢測在腫瘤診療中極具前途，成為一種較為理想的“液體活檢”方法。

外泌體在肝癌方面的診斷還沒有明確的相關(guān)報(bào)道，僅有文獻(xiàn)稱與傳統(tǒng)肝癌標(biāo)志物AFP相比，外泌體中miRNA表達(dá)水平在肝癌早期即發(fā)生改變且變化水平較大[Belov L1,Matic KJ2,Hallal S2,Best OG2,3,Mulligan SP2,3,Christopherson RI2.Extensivesurface protein profiles of extracellular vesicles from cancer cells mayprovide diagnostic signatures from blood samples.J ExtracellVesicles.2016Apr15；5:25355]，與AFP聯(lián)用有助于提高早期肝癌篩查的診斷效能。剛剛發(fā)表在《Hepatology》上的研究表明，血漿和外泌體中的microRNA let-7與慢性丙肝病人肝纖維化進(jìn)展有一定的關(guān)系[Circulating let-7levels in plasma and extracellularvesicles correlate with hepatic fibr osis progression in chronic hepatitisC.Hepatology.2016May 26.doi:10.1002/hep.28660]。miRNAs被發(fā)現(xiàn)參與了多種癌癥的發(fā)生與發(fā)展，miRNA表達(dá)與功能分析證明miRNA顯著影響了腫瘤的發(fā)生，其表達(dá)失調(diào)促進(jìn)惡性表型的形成，使其成為潛在的腫瘤診斷預(yù)后判斷的生物標(biāo)記物，也是腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。

miRNA-485-3p和miRNA-885-5p是一種已知的小分子RNA。本發(fā)明提供血漿外泌體miRNA-485-3p和miRNA-885-5p作為肝癌(早期)的診斷標(biāo)志物的應(yīng)用，所述miRNA-485-3p和miRNA-885-5p的序列分別為5’-AGAGAGGAGAGCCGUGUAUGAC-3’和5’-UCCAUUACACUACCCUGCCUCU-3’。

現(xiàn)有的關(guān)于miR-485-3p的報(bào)道發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-485-3p的高表達(dá)與大于或等于1cm的腫瘤大小、臨床晚期、腺體外浸潤、BRAF突變和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。血漿外泌體miR-485-3p還可作為甲狀腺乳頭狀癌診斷的無創(chuàng)生物標(biāo)志物。