[發(fā)明專利]HAP1在篩選神經(jīng)炎癥治療藥物中的應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210417621.4
• 申請日: 2022-04-20
• 公開（公告）號: CN114668861A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘靜瑩;楊日云;包璟崟;吳泳江
• 申請（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;C12Q1/6883
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

本發(fā)明公開了HAP1在篩選神經(jīng)炎癥治療藥物中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明中選用HAP1野生型老鼠作為對照組、HAP1雜合子小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，構(gòu)建了神經(jīng)病理急性疼痛，分別檢測兩組小鼠的術(shù)后炎癥反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，降低HAP1的表達(dá)，可以顯著減少炎癥反應(yīng)，降低膠質(zhì)細(xì)胞活化水平，抑制了炎癥因子的釋放；最終發(fā)揮了控制神經(jīng)炎癥的作用。這一發(fā)現(xiàn)可以為疼痛研究提供新的分子靶點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及HAP1在篩選神經(jīng)炎癥治療藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

神經(jīng)病理性疼痛是由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而造成的疼痛，屬于慢性疼痛，主要表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏、異常疼痛和感覺異常等臨床特征。由神經(jīng)系統(tǒng)損傷或功能障礙引起的神經(jīng)性疼痛是人類最棘手的問題之一。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)約6.9％-10％的慢性疼痛患者具有神經(jīng)病理性疼痛癥狀。由于神經(jīng)性疼痛強(qiáng)烈且持久，常常可抵抗所有可用的鎮(zhèn)痛措施，對患者而言不僅是身體的摧殘，更是心理的折磨，極大降低了患者的生活質(zhì)量。同時神經(jīng)性疼痛病因復(fù)雜，有關(guān)其具體的發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚不十分清楚。因此，深入研究神經(jīng)性疼痛的分子機(jī)制對于尋找新的鎮(zhèn)痛靶點(diǎn)十分重要。

背根神經(jīng)節(jié)和脊髓是負(fù)責(zé)接收和傳送傷害性刺激信息，接收和處理刺激信息的初級門戶。脊髓通過“閘門控制”機(jī)制在局部參與傷害性信息傳入的調(diào)節(jié)，是疼痛信號處理的初級調(diào)節(jié)中樞。神經(jīng)病理性疼痛涉及多種分子機(jī)制，如：如中樞敏化、膠質(zhì)細(xì)胞激活和增生、炎性因子釋放等。脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的激活，如小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)(特別是神經(jīng)炎癥)的重要組成部分，在神經(jīng)性疼痛的發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。眾所周知，炎性趨化因子是調(diào)節(jié)外周免疫細(xì)胞運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)因子；也表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，參與神經(jīng)元發(fā)育、突觸傳遞和神經(jīng)炎癥等多個通路的調(diào)節(jié)。炎癥因子通過影響神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用，從而參與調(diào)節(jié)神經(jīng)性疼痛和炎癥性疼痛過程。神經(jīng)炎性反應(yīng)始終是神經(jīng)性疼痛病理機(jī)制中的重要組成部分。因此探索炎性相關(guān)的分子及機(jī)制，對疼痛的研究具有十分重要的作用。

亨廷頓蛋白相關(guān)蛋白1(Huntingtin associated protein 1，HAP1)廣泛表達(dá)在神經(jīng)系統(tǒng)中，包括大腦、脊髓和背根神經(jīng)節(jié)中表達(dá)較高。在神經(jīng)系統(tǒng)中，HAP1主要參與細(xì)胞內(nèi)囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)，例如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、14-3-3蛋白、鳥嘌呤核苷酸交換因子等；調(diào)節(jié)膜受體蛋白的循環(huán)和表達(dá)，包括γ-氨基丁酸A型受體、雄激素受體、L型鈣通道、酪氨酸受體激酶A。免疫染色結(jié)果顯示，70-80％的HAP1陽性神經(jīng)元與傷害性或機(jī)械感受標(biāo)記物共定位，如CGRP、SP、NOS、TRPV1等，表明HAP1可能參與神經(jīng)性疼痛的發(fā)生發(fā)展過程，發(fā)揮著特殊的作用。

因此，本發(fā)明的主要目的是檢測神經(jīng)性疼痛過程中，HAP1是否參與膠質(zhì)細(xì)胞的激活，以及對炎癥因子的表達(dá)是否具有調(diào)控作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供HAP1在篩選神經(jīng)炎癥治療藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明中，選用HAP1野生型老鼠作為對照組、HAP1雜合子小鼠作為實(shí)驗(yàn)組，構(gòu)建神經(jīng)病理急性疼痛(SNI)，分別檢測兩組小鼠的術(shù)后炎癥反應(yīng)(星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞活化水平；促炎因子和抗炎因子的表達(dá)水平)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，降低HAP1的表達(dá)，可以顯著減少炎癥反應(yīng)，降低膠質(zhì)細(xì)胞活化水平，抑制了炎癥因子的釋放；最終發(fā)揮了控制神經(jīng)炎癥的作用。這一發(fā)現(xiàn)可以為疼痛研究提供新的分子靶點(diǎn)。

附圖說明

圖1為SNI術(shù)后一周HAP1野生型小鼠脊髓切片染色結(jié)果。其中：Contra代表對照側(cè)，Ipsi代表手術(shù)側(cè)；左側(cè)圖分別為GFAP染色檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度結(jié)果和手術(shù)側(cè)放大圖片；右側(cè)圖分別為Iba1染色檢測小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度結(jié)果和手術(shù)側(cè)放大圖片；標(biāo)尺為100微米。

圖2為SNI術(shù)后一周HAP1雜合子小鼠脊髓切片染色結(jié)果。其中：Contra代表對照側(cè)，Ipsi代表手術(shù)側(cè)；左側(cè)圖分別為GFAP染色檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度結(jié)果和手術(shù)側(cè)放大圖片；右側(cè)圖分別為Iba1染色檢測小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度結(jié)果和手術(shù)側(cè)放大圖片；標(biāo)尺為100微米。