[發(fā)明專利]一種疾病相關(guān)標志物的篩選方法、應(yīng)用及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210415007.4
• 申請日: 2021-11-11
• 公開（公告）號: CN115097137A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邱曉彥;段富剛;朱珠;戴慧;張奕瀟;王一凡;姜文華
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N33/573;G01N33/92
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏

本發(fā)明公開了一種疾病相關(guān)標志物的篩選方法、應(yīng)用及試劑盒。篩選方法包括：使用能夠結(jié)合免疫球蛋白(Ig)的物質(zhì)，分別從第一批健康樣本血清和患病樣本血清中純化出Ig復(fù)合物；將與Ig相結(jié)合的蛋白進行蛋白質(zhì)譜測序分析，比較健康樣本與患病樣本的差異，找到只出現(xiàn)在患病樣本中的差異蛋白，即為該疾病相關(guān)潛在標志物；最后，再進一步驗證該潛在標志物：使用第二批健康樣本和患病樣本的血清(擴大病例)，純化獲得Ig復(fù)合物，利用差異蛋白的特異性抗體進行進一步鑒定。該方法先從血清中獲得Ig復(fù)合物(而不是全血清)，再將與Ig相結(jié)合的蛋白進行蛋白質(zhì)譜測序聯(lián)合特異性抗體分析，能夠快速有效地篩選出疾病相關(guān)標志物。

本申請是申請日2021年11月11日，申請?zhí)?02111329614.0，發(fā)明創(chuàng)造名稱“一種疾病相關(guān)標志物的篩選方法、應(yīng)用及試劑盒”的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)與免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種疾病相關(guān)標志物的篩選方法、應(yīng)用及試劑盒。

背景技術(shù)

生物標志物(Biomarker)是指一種具有可客觀檢測和評價的特性，可作為正常生物學(xué)過程、病理過程或治療干預(yù)藥理學(xué)反應(yīng)的指示因子的生物體內(nèi)物質(zhì)。在疾病的診斷和治療研究中，尋找和發(fā)現(xiàn)有價值的生物標志物已經(jīng)成為當前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。

公開號CN108956791A的專利公開了一種大規(guī)模篩選蛋白質(zhì)生物標志物的方法：將生物組織對照樣本和參考樣本(病理樣本)勻漿、裂解；裂解液進行酶解、除鹽等操作；用LC-MS/MS 液質(zhì)聯(lián)用的方式進行蛋白質(zhì)鑒定；通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強度，分析樣品蛋白的豐度變化，以MS1為基礎(chǔ)，計算每個肽段的信號強度在LC-MS上的積分，以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ)，大規(guī)模對數(shù)據(jù)進行修正；通過修正的數(shù)據(jù)分析結(jié)果篩選出顯著上調(diào)或下調(diào)的蛋白質(zhì)生物標志物。

公開號CN111999403A的專利公開了一種瓦斯爆炸血清標志物篩選方法，以無創(chuàng)大鼠和瓦斯爆炸肺損傷大鼠血清樣本進行LC-MS檢測，采用LC-MS血清代謝組學(xué)技術(shù)進行分析，構(gòu)建模型，利用模型進行數(shù)據(jù)處理，從候選代謝產(chǎn)物中篩選肺損傷模型生物標志物。

目前常用的篩選疾病相關(guān)特異性標志物的研究，普遍采用全基因組數(shù)據(jù)或者基因表達數(shù)據(jù)、全血清蛋白數(shù)據(jù)等作為分析基礎(chǔ)。以新冠肺炎為例，目前通過蛋白質(zhì)譜技術(shù)，已經(jīng)揭示了重癥COVID-19患者血清中蛋白質(zhì)和代謝物的特征變化，鑒定了一些可能具有應(yīng)用潛質(zhì)的標志分子。然而，幾乎所有尋找特異性生物標志物的研究都是利用COVID-19的全血清蛋白。對于蛋白質(zhì)譜技術(shù)來說，由于其所用樣品量少、而特異性標志物在血清或血漿含量卻較低，顯然，對于所需樣本量少而為“優(yōu)勢”的蛋白質(zhì)譜技術(shù)而言可謂是“大海撈針”，即要從這些目標分析物中篩選出有意義的標志物并非易事。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題，提供一種疾病相關(guān)潛在生物標志物的篩選方法、應(yīng)用及試劑盒，該方法能夠快速篩選出有意義的標志物，為疾病的診斷和治療提供靶標基礎(chǔ)。

第一方面，本發(fā)明提供了一種疾病相關(guān)潛在標志物的篩選方法，包括：

(1)使用能夠結(jié)合Ig(免疫球蛋白)的物質(zhì)，分別從第一批健康樣本血清和患病樣本血清中純化出Ig復(fù)合物；

(2)對Ig復(fù)合物進行質(zhì)譜分析和/或糖譜分析，比較健康樣本與患病樣本的分析結(jié)果，找到只高頻出現(xiàn)在患病樣本的Ig復(fù)合物中與Ig相結(jié)合的差異蛋白，和/或只高頻出現(xiàn)在患病樣本的Ig復(fù)合物中的差異糖基，該差異蛋白和/或差異糖基即為該疾病相關(guān)的潛在標志物；

(3)進一步擴大健康樣本和患病樣本的數(shù)量，采用與步驟(1)相同的方法純化獲得Ig 復(fù)合物，驗證差異蛋白和/或差異糖基。

可選或優(yōu)選的，上述方法中，所述驗證的方法如下：