[發(fā)明專利]水痘-帶狀皰疹病毒mRNA疫苗及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210413770.3
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114854772A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 申鎮(zhèn)維;孫瑤;胡曉;李光勇
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江君怡生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/38
• 分類號: C12N15/38;C12N15/85;A61K39/25;A61P31/22
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發(fā)明涉及核酸疫苗領(lǐng)域，尤其涉及水痘?帶狀皰疹mRNA疫苗及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的編碼水痘?帶狀皰疹病毒抗原的mRNA含有編碼水痘?帶狀皰疹病毒的糖蛋白E的編碼區(qū)，該mRNA遞送至體內(nèi)可以誘導(dǎo)針對糖蛋白E的特異性抗體反應(yīng)及CD4+T細胞應(yīng)答。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸疫苗領(lǐng)域，尤其涉及水痘-帶狀皰疹病毒mRNA疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

帶狀皰疹(Herpes zoster，HZ)是由水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-zostervirus，VZV)的再激活感染所致的神經(jīng)皮膚病，其最常見和嚴(yán)重的并發(fā)癥是愈后神經(jīng)痛(Postherpetic neuralgia，PHN)。兒童時期初次感染VZV引起水痘，恢復(fù)后病毒潛伏在體內(nèi)感覺神經(jīng)節(jié)，少數(shù)患者在成年后由于某些原因?qū)е旅庖吡ο陆担《驹偌せ疃饚畎捳睢３赡耆巳魏文挲g階段都可能發(fā)生帶狀皰疹，老年人和免疫功能低下人群中發(fā)生率更高。

疫苗接種是預(yù)防和控制帶狀皰疹及其并發(fā)癥最有效的手段。目前批準(zhǔn)上市的疫苗有兩種，分別是帶狀皰疹減毒活疫苗和重組帶狀皰疹佐劑亞單位疫苗。此外，還有一種帶狀皰疹滅活疫苗處于臨床研究階段。

2006年，美國FDA批準(zhǔn)首個帶狀皰疹減毒活疫苗(Oka/Merck strain，MerckCo)上市，該疫苗是由Merck公司開發(fā)的，基于其已上市的水痘減毒活疫苗(Varivax，Oka/Merck)，經(jīng)濃縮制備，病毒含量是水痘減毒活疫苗的14倍，但是該疫苗預(yù)防帶狀皰疹的效力僅為60％-70％。Merck公司開發(fā)的帶狀皰疹減毒活疫苗抗原用量大、生產(chǎn)成本高，免疫原性較差，誘導(dǎo)細胞免疫效果差，疫苗保護效力會隨著年齡的增長而逐漸降低，并且由于其為減毒活疫苗，限制了其在免疫抑制人群、活動性肺結(jié)核患者、孕婦等人群的中使用。因此，2020年7月起，該疫苗已不再使用。

2017年，重組帶狀皰疹佐劑亞單位疫苗(Shingrix，GSK)柵DA批準(zhǔn)上市用于50歲人以上群預(yù)防帶狀皰疹和愈后神經(jīng)痛，該疫苗由重組VZV糖蛋白E和T細胞加強佐劑AS01B組成，針對帶狀皰疹的總體疫苗效力為97.2％。AS01B佐劑包含兩種免疫刺激劑MPLA(3-O-desacyl-4’-monophosphoryl 1ipid A)和QS-21：MPLA可激活天然免疫系統(tǒng)，刺激細胞因子的分泌和協(xié)同刺激分子的表達；QS-21是一種皂素，可促進抗原特異性抗體反應(yīng)。但QS-21具有溶血性，需要配合膽固醇和脂質(zhì)體形式使用以消除副作用。此外，采用CHO細胞系生產(chǎn)糖蛋白E，具有成本高，發(fā)酵、純化工藝復(fù)雜、糖基化產(chǎn)物不穩(wěn)定、質(zhì)量控制難度大等缺點。

近年來，有研究者開發(fā)了由經(jīng)γ射線照射而制得的水痘-帶狀皰疹滅活疫苗，臨床試驗結(jié)果表明：該疫苗具有良好的耐受性，但是由于其免疫原性較低，需要采用四劑量免疫接種程序，而且對血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者無效。盡管帶狀皰疹疫苗在全球范圍內(nèi)大多數(shù)國家被推廣應(yīng)用，遺憾的是，目前中國仍無帶狀皰疹疫苗上市。

疫苗誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答即VZV特異性抗體的能力，是疫苗有效性的一個保障。抗體水平的增長倍數(shù)與疫苗的保護性效力密切相關(guān)；同時，帶狀皰疹的發(fā)生也與體內(nèi)VZV特異性細胞介導(dǎo)免疫(Cell-mediated immunity，CMI)的下降有著重要的關(guān)聯(lián)。由脂質(zhì)納米粒(LNPs)包裹的體外轉(zhuǎn)錄的mRNAs組成的核酸疫苗不僅可有效引發(fā)特異性的體液免疫，還激發(fā)CD4+T細胞免疫反應(yīng)。通過LNP遞送mRNA抗原可提高對疫苗的免疫應(yīng)答，LNP可以保護mRNA不受酶降解，并促進靶細胞對mRNA的有效攝取和細胞內(nèi)釋放。目前尚未見預(yù)防帶狀皰疹的mRNA疫苗的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供水痘-帶狀皰疹病毒mRNA疫苗及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明提供了編碼水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白E的核酸，包括I)～IV)中至少一種：

I)、具有如SEQ ID No：1所示核苷酸序列的核酸；