[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的引物、熒光探針和試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210411190.0
• 申請(qǐng)日: 2022-04-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115094151A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江飚;蘇友祿;孫龑鑫;劉春;李薇
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/365
• 代理公司: 廣州海心聯(lián)合專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 馬赟齋

1.一種用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的引物和熒光探針，其特征是，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物如序列表中SEQ ID NO.1；所述反向引物如序列表中SEQ IDNO.2；所述熒光探針如序列表中SEQ ID NO.3。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的引物和熒光探針，其特征是，所述熒光探針的5’端和3’端分別用熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)修飾。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的引物和熒光探針，其特征是，修飾所述5’端的所述熒光報(bào)告基團(tuán)為：FAM、HEX、ROX、Cy3或Cy5，修飾所述3’端淬滅基團(tuán)為：TAMRA NHS、BHO1、BHO2、BHO3或Eclipse。

4.包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的引物和熒光探針的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，所述正向引物的終濃度為0.1～0.3μM，所述反向引物的終濃度為0.1～0.3μM，所述熒光探針的終濃度為0.3～0.6μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，還包括：PCR反應(yīng)液、核酸釋放試劑、陰性質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，所述PCR反應(yīng)液包括：無(wú)菌水、具有5’→3’外切活性的DNA聚合酶、dNTP、10×PCR Buffer和含Mg離子的溶液。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，所述PCR反應(yīng)液中所述Taq酶的終濃度為0.01～0.03U/μL，所述dNTPs的終濃度為0.2～0.4mM，所述10×PCR Buffer為原濃度的1/10，所述MgCl₂的終濃度為1.5～3.0mM，溶劑為無(wú)菌水。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，所述核酸釋放試劑包括：無(wú)菌水、Triton-X100、NP-40和Tris-HCL；所述陰性質(zhì)控品為不含鰤?mèng)~諾卡氏菌的ITS基因的PMT18-T載體質(zhì)粒DNA；所述陽(yáng)性質(zhì)控品為含有所述鰤?mèng)~諾卡氏菌的ITS基因片段的PMT18-T載體質(zhì)粒DNA，濃度為50ng/μL；所述具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶為T(mén)aq酶。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)鰤?mèng)~諾卡氏菌核酸的試劑盒，其特征是，所述核酸釋放試劑中所述Triton-X100的終濃度為0.03～0.3％，所述NP-40的終濃度為0.04～0.4％，所述Tris-HCL的終濃度為0.01～0.1M，溶劑為無(wú)菌水；所述Tris-HCL的pH值為7.8～8.2。