[發明專利]一種蟲草屬菌株的培養方法

有效

• 申請號: 202210408468.9
• 申請日: 2022-04-19
• 公開（公告）號: CN114717120B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 范文麗;尹賾鵬;趙英明;李天來;王晨露;祖智超;譚昌華
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京北匯律師事務所 11711
• 代理人: 畢艷紅

本專利公開了一種蟲草屬菌株的培養方法，具體地，該方法至少包括在蟲草屬菌株特別是蛹蟲草菌株培養中使用褪黑素。經實驗證明褪黑素能有效逆轉菌種退化不影響其產量和其它經濟性狀。經此方法培養已經退化的蛹蟲草菌株，菌株角變頻率明顯下降，氣生菌絲明顯減少，菌絲中活性氧、丙二醛明顯減少，活性物質蟲草素、腺苷含量明顯增多。且此方法操作簡單、經濟實惠，安全無害，效果顯著。

技術領域

本發明屬于真菌菌種種性保持領域，具體涉及一種提高蛹蟲草菌種活性、延緩菌種退化的方法，更具體涉及一種有效延緩菌種退化、提高菌種活性的蛹蟲草液體深層發酵培養方法。

背景技術

蛹蟲草作為一種重要的藥用食用菌，其菌種退化問題一直是研究者關注的熱點。蛹蟲草受到醫藥界、精細化工業高度關注，其主要活性成分如蟲草素、腺苷、多糖、蟲草酸、麥角甾醇等功效逐漸被認知并廣泛應用，具有抗腫瘤、免疫調節、抗氧化、降血脂等功效。在蛹蟲草菌種研究中發現，菌種的退化導致活性氧、丙二醛有害物質累積，其代謝產物合成能力下降等。因而，退化嚴重影響了蛹蟲草的經濟性狀，給大規模生產及菌種保藏工作帶來重大損失。

導致蛹蟲草退化的原因有很多，可以是自身基因突變，也可能是不良環境因素導致的變異，或者微生物污染導致，或者保藏方式不當，或連續轉代等都會使得退化現象不斷擴大。

蛹蟲草菌種主要采取復壯的方式，使退化菌株恢復優良的性狀。例如：組織分離:將退化的蛹蟲草栽培出菇，挑選外觀健壯的子實體，在無菌條件下重新進行組織分離。菌絲純化與尖端菌絲分離:挑取健壯的菌絲尖端部分，進行培養，以期獲得復壯的菌株。有性孢子分離篩選:選擇長勢好的子實體，采用孢子收集器將有性孢子收集后進行多孢或單孢分離培養。將所得單核菌絲還要與可親和的單核菌絲雜交后形成雙核菌絲，再進行出菇實驗，確定豐產的菌株。添加抗生素，對菌株進行復壯。

以上方法都是在菌株退化后，再利用不同方法，重新選擇。前三種方法都費時耗力，而且不能保證得到復壯的菌株，最后一種方法，雖然簡單，但要添加各種不同抗生素，目前抗生素使用已受到嚴格控制，因此很難得到很好推廣和應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種有效防止蛹蟲草菌種退化的方法，該方法突破了傳統的菌株復壯的方法，采用簡單、經濟、無害的褪黑素，且效果顯著。

本發明的一種有效延緩蛹蟲草菌種退化的方法，具體地，該方法至少包括在蛹蟲草菌株培養中使用褪黑素。在本發明提供的實施方式中，使用含有褪黑素的培養基培養蛹蟲草菌株。

具體地，褪黑素在培養基中的濃度為10～200mol/L，優選地，褪黑素在培養基中的濃度為20～150mol/L，更加優選為50～100mol/L，特別優選為60mol/L。

可選的培養基包括PDA或PDB加富培養基培養蛹蟲草菌。

所述PDA加富培養基的組成為：基于每1000ml的培養基，含有：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、蛋白胨3g、硫酸鎂1.5g、磷酸二氫鉀3g、維生素B1?0.01g、蒸餾水補足至1000ml。

所述PDB加富培養基的組成為：基于每1000ml的培養基，含有：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、硫酸鎂1.5g、磷酸二氫鉀3g、維生素B1?0.01g、蒸餾水補足至1000ml。

更具體地，本發明給出了褪黑素培養蛹蟲草的方法，包括以下步驟：

將初期退化蛹蟲草菌株，接種于培養基中。對于蛹蟲草的接種量沒有特別的要求。通常基于基于100重量份的培養基，接種0.1～5重量份的初期退化蛹蟲草菌株。在優選的實施方式中，初期退化蛹蟲草菌株的接種量為0.3～1％。在實際操作中，也可基于10ml的培養基，接種約為0.05～0.1cm²的蛹蟲草菌。