[發明專利]用于TBI免疫調控及組織修復的復合水凝膠及其制備方法

有效

• 申請號: 202210405920.6
• 申請日: 2022-04-18
• 公開（公告）號: CN114848919B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 劉昌勝;陳曦;王碧雪;張雪薇
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: A61L27/52
• 分類號: A61L27/52;A61L27/36;A61L27/22;A61L27/56;A61L27/50;A61L27/38
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;徐迅

1.一種復合水凝膠，其特征在于，所述復合水凝膠由甲基丙烯酰化明膠GelMA、腦脫細胞基質dBECM和光交聯引發劑LAP混合后進行光交聯得到，其中，GelMA和dBECM的質量比為1∶1-10∶1。

2.一種如權利要求1所述的復合水凝膠的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

i.提供LAP溶液；

ii.將甲基丙烯?；髂zGelMA、腦脫細胞基質dBECM分別溶解于LAP溶液中得到GelMA溶液、dBECM溶液；

iii.將GelMA溶液、dBECM溶液混合得到水凝膠預聚溶液；

iv.用波長405nm的藍光照射上述預聚溶液20-40s，得到所述復合水凝膠。

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，利用以下步驟制備腦脫細胞基質dBECM：

a)凍融循環：將腦組織經液氮冷凍，融化后用PBS溶液清洗，重復冷凍、融化、清洗3-5次；

b)在振蕩條件下進行化學酶解三個周期處理得到脫細胞基質：

第一周期：dH₂O處理5-10h、0.02-0.1g/mL脫氧膽酸鈉處理10-24h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min、dH₂O處理2-6h、1v/v％-5v/v％Triton X-100處理1-3h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min；

第二周期：dH₂O處理2-6h、0.02-0.1g/mL脫氧膽酸鈉處理10-24h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min、dH₂O處理2-6h、1v/v％-5v/v％Triton X-100處理1-3h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min；

第三周期：dH₂O處理2-6h、0.02-0.1g/mL脫氧膽酸鈉處理10-24h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min、dH₂O處理2-6h、1v/v％-5v/v％Triton X-100處理1-3h、PBS處理20-60min、DNaseⅠ處理45-90min、PBS處理20-60min；

c)將得到的脫細胞基質進行冷凍干燥得到粉末狀腦脫細胞基質dBECM。

4.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，利用以下步驟制備甲基丙烯酰化明膠GelMA：

a')將明膠溶解于PBS溶液中，得到明膠溶液；

b')將甲基丙烯酸酐MA滴加到明膠溶液中，在40-60℃下攪拌2-3h，加入30-40℃的PBS溶液使反應停止；

c')用10-14kDa的透析袋將步驟b')所得溶液在45-50℃下透析，以除去未反應的甲基丙烯酸酐MA；

d')將透析后的溶液離心取上清液，凍干得到泡沫狀的甲基丙烯?；髂zGelMA。

5.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述LAP溶液為LAP的PBS溶液，濃度為0.0025-0.0050g/mL。

6.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟ii)中，

將甲基丙烯?；髂zGelMA加入LAP溶液，于45-60℃下攪拌5-15min得到GelMA溶液；

將腦脫細胞基質dBECM加入LAP溶液，于20-37℃下攪拌2-4h得到dBECM溶液。

7.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟iii)中，所述預聚溶液中GelMA、dBECM、LAP的含量分別為3-8w/v％、0.5-5w/v％、0.25-0.5w/v％。