[發明專利]一種與三疣梭子蟹卵巢發育相關的miRNA類似物及其應用

有效

• 申請號: 202210401330.6
• 申請日: 2022-04-18
• 公開（公告）號: CN114854745B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 孟憲亮;張夢倩;于雪娥;高保全;劉萍;李健
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P15/08
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明屬于水產養殖生物技術領域，公開了一種與三疣梭子蟹卵巢發育相關的miRNA類似物及其應用。所述miRNA類似物為let?7?5p、miR?141?3p中的一種或者多種。本發明在合成let?7?5p agomir和miR?141 agomir后，將兩者同時通過第三步足基部注射到三疣梭子蟹雌蟹體內，即可通過下調甲基法尼酯分解途徑關鍵酶基因JHE?like CXE?1和JHE?like CXE?2表達以及上調卵黃蛋白原基因vtg表達，實現促進三疣梭子蟹外源性卵黃合成，加快三疣梭子蟹卵巢發育成熟的目的，并且本發明的方法及制備的促進劑對親體造成的副作用小，高效、可靠，適用于大量親體促熟。

技術領域

本發明屬于水產養殖生物技術領域，具體涉及一種與三疣梭子蟹卵巢發育相關的miRNA類似物及其應用。

背景技術

三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）屬于甲殼綱（Crustacea）、十足目（Decapoda）、梭子蟹科（Portunidae）、梭子蟹屬（Portunus），是我國重要的海水養殖種類。近些年，梭子蟹養殖產業發展迅速。然而，由于產業缺乏有效的生殖調控技術，高質量苗種的產量無法滿足需求，嚴重限制了養殖產業的發展。因此，建立高效的生殖調控技術對于三疣梭子蟹養殖產業可持續發展具有重要意義。

目前，切除眼柄是生產中常用的刺激甲殼類卵巢成熟的方法，但是切除眼柄會損傷親體，且會造成卵質量下降、孵化率降低等問題。microRNA（以下簡稱miRNA）一類非編碼RNA，能夠與靶基因的3′UTR特異性結合，對靶基因表達進行負調控，在動物生殖調控中具有重要作用。通過注射人工合成的miRNA類似物，可以模擬內源miRNA對其靶基因的調控作用，實現對卵巢發育過程的控制。

發明內容

本發明的目的在于提供一種與三疣梭子蟹卵巢發育相關的miRNA類似物及其應用。所述miRNA類似物包括let-7-5p和miR-141-3p，兩者對甲基法尼酯（MF）分解途徑關鍵酶具有很好的抑制靶向作用，進而促進三疣梭子蟹卵巢成熟發育。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一種與三疣梭子蟹卵巢發育相關的miRNA類似物，所述miRNA類似物為let-7-5p、miR-141-3p中的一種或者多種。

本發明還提供了所述的miRNA類似物在制備三疣梭子蟹卵巢發育促進劑中的應用。

進一步的，所述卵巢發育促進劑中同時包含let-7-5p agomir和miR-141 agomir。

進一步的，所述let-7-5p agomir的正義鏈序列為：AACUAUACAACCUACUACCUCAGG，反義鏈序列為：UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUU。

進一步的，所述miR-141 agomir的正義鏈序列為：UAACACUGUCUGGUAAAGAUGGGG，反義鏈序列為：CCAUCUUUACCAGACAGUGUUAUU。

進一步的，所述卵巢發育促進劑的制備和使用方法為：合成let-7-5p agomir和miR-141 agomir后，將兩者進行混合，制成三疣梭子蟹卵巢發育促進劑，直接將卵巢發育促進劑通過第三步足基部注射到三疣梭子蟹雌蟹體內即可。

進一步的，所述miRNA類似物通過下調JHE-like CXE-1和JHE-like CXE-2基因表達以及上調vtg基因表達，以達到加快三疣梭子蟹卵巢發育成熟的作用。