[發(fā)明專利]一種用于胃組織tRF-28-ZJ47D112Z4DZ的相對定量檢測方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210400614.3
• 申請日: 2022-04-16
• 公開（公告）號: CN114891884A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 俞秀沖;郭俊明;宋雪梅;嚴志龍;張雙雙;謝瑤瑤;翁秋燕
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波市第一醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;C12Q1/6851;C12N15/10
• 代理公司: 寧波誠源專利事務(wù)所有限公司 33102
• 代理人: 葉桂萍

本發(fā)明涉及一種用于胃組織tRF?28?ZJ47D112Z4DZ的相對定量檢測方法及其應(yīng)用，其特征在于：該tRF?28?ZJ47D112Z4DZ的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，該tRF?28?ZJ47D112Z4DZ在胃癌患者組織中的特異性表達下調(diào)：所述引物為：F1：5'?CTCCCGGTTGGCTTCCTAAG?3'；R1：5'?GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT?3'，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于胃癌組織中的特異性表達下調(diào)tRF?28?ZJ47D112Z4DZ可作為胃癌診斷的新型分子標記物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種胃癌組織中tRNA衍生片段的檢測方法，尤其涉及一種用于胃組織tRF-28-ZJ47D112Z4DZ的相對定量檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

早期診斷是提高胃癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素，但是早期胃癌患者通常無癥狀或癥狀不典型。因此，胃癌初診時患者大多數(shù)已屬晚期，預(yù)后差，5年生存率低于30％。然而，胃癌患者如能早期診斷和治療，其5年生存率可達到90％。因此發(fā)現(xiàn)新型胃癌診斷標志物對于胃癌的早期診斷、判斷療效和預(yù)測復(fù)發(fā)具有重要價值。

近年研究表明，tRNA衍生片段(tRNA-derived fragment，tRF)是tRNA被特異性切割產(chǎn)生的具有調(diào)節(jié)功能的小非編碼RNA分子，參與多種生理和病理過程。由于tRF具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和組織特異性表達等特點，具有成為腫瘤診斷新型標志物的巨大潛力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀而提供一種檢測組織中tRF-28-ZJ47D112Z4DZ表達的引物在制備胃癌輔助診斷試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為：該檢測組織中 tRF-28-ZJ47D112Z4DZ表達的引物在制備胃癌輔助診斷試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于：該tRF-28-ZJ47D112Z4DZ的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示， UUGGCUUCCUAAGCCAGGGAUUGUGGGU，所述tRF-28-ZJ47D112Z4DZ在胃癌患者組織中的特異性表達下調(diào)：

所述引物為：

F1：5’-CTCCCGGTTGGCTTCCTAAG-3'；

R1：5’-GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT-3’。

進一步地，所述試劑盒還包括有內(nèi)參小核RNU6的特異性擴增上下游引物：

F2：5’-CGGCAGCACATATACTAAAATTGGAA-3’

R2：5’-CGAATTTGCGTGTCATCCTTGCG-3’。

進一步地，所述試劑盒還包括有內(nèi)參小核RNU6的逆轉(zhuǎn)錄引物序列為：

5'-GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCA AAATA-3'。

tRF-28-ZJ47D112Z4DZ的逆轉(zhuǎn)錄引物序列為：

5'-GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCA CCCAC-3'。

本發(fā)明還提供一種檢測tRF分子標記物的方法，其特征在于所述的方法包括如下步驟：

(1)采集胃癌組織，稱取組織，提取組織中的總RNA；

(2)將總RNA特異性逆轉(zhuǎn)錄成cDNA；

(3)將cDNA進行實時熒光定量PCR方法檢測，反應(yīng)結(jié)束后檢測樣品中 tRF-28-ZJ47D112Z4DZ和內(nèi)參小核RNU6的Cq值；