[發明專利]檢測血漿中tRF水平的胃癌分子標記物以及應用

在審

• 申請號: 202210400599.2
• 申請日: 2022-04-16
• 公開（公告）號: CN114875145A
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 郭俊明;宋雪梅;俞秀沖;翁秋燕;張雙雙;謝瑤瑤
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 徐雪波;葉桂萍

1.一種用于胃癌輔助診斷的檢測試劑盒，其特征在于：包括用于檢測血漿樣本中tRF-20-V29K9UV3、tRF-27-87R8WP9N1E5的其中一個或是二個聯合的試劑，其中：

tRF-20-V29K9UV3的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述tRF-20-V29K9UV3在胃早癌患者血漿中顯著上調；所述引物為：F1：5'-CCGTTGGTAGGATGGGGTGT-3'；R1：5'-GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT-3'；

tRF-27-87R8WP9N1E5的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，

所述tRF-27-87R8WP9N1E5在胃早癌患者血漿中顯著上調；F2：5'-GGTCTCTGGTGGTCTAGTGGT-3'；R2：5'-GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT-3'。

2.根據權利要求1所述的用于胃癌輔助診斷的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括有tRF-20-V29K9UV3和tRF-27-87R8WP9N1E5的逆轉錄引物序列，其中，

tRF-20-V29K9UV3的逆轉錄序列如SEQ ID No.3所示：5'-GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCACCTAT-3'；

tRF-27-87R8WP9N1E5的逆轉錄序列如SEQ ID No.4所示：5'-GCAGACGAGGGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTCCTACCCTCGTCTGCGAATCC-3'。

3.根據權利要求1或2所述的用于胃癌輔助診斷的檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括有tRF-20-V29K9UV3和tRF-27-87R8WP9N1E5的探針引物序列，其中，

tRF-20-V29K9UV3的探針引物序列如SEQ ID No.5所示：5'-FAM-TGTCCTACCCTCGTCTGCACCTAT-TAMRA-3'；

tRF-27-87R8WP9N1E5的探針引物序列如SEQ ID No.6所示：5'-FAM-AGGATTCGCAGACGAGGGTAGGACA-TAMRA-3'。

4.一種檢測血漿中tRF分子標記物的方法，其特征在于：所述tRF分子標記物為權利要求1中所述的tRF-20-V29K9UV3和tRF-27-87R8WP9N1E5，所述的方法包括如下步驟：

(1)采集血液，提取血漿中的總RNA；

(2)將總RNA逆轉錄成cDNA；

(3)利用tRF-20-V29K9UV3和tRF-27-87R8WP9N1E5的特異性擴增引物對步驟(2)的cDNA溶液進行熒光定量PCR檢測，反應結束后檢測熒光信號值并設定Y值；

(4)獲得每個樣品的Cq值，也就是y值，并按所檢測tRF對應的標準曲線計算出相應的拷貝數x后，將按照400×10x/3計算每個樣品對應1mL血漿時的拷貝數，并進行早期胃癌患者1mL血漿內tRF-20-V29K9UV3和tRF-27-87R8WP9N1E5拷貝數的統計學分析。