[發明專利]具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽

有效

• 申請號: 202210396235.1
• 申請日: 2022-04-15
• 公開（公告）號: CN114716523B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 沈群;付永霞;王超;趙卿宇;薛勇;趙亮星;牛雁
• 申請（專利權）人: 中國農業大學;山西東方物華農業科技集團有限公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;A61K38/16;A61P3/10;A23L33/18;C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 陳波

具有α?葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽。本申請提供了抑制α?葡萄糖苷酶的熟小米醇溶蛋白肽及其應用和篩選方法，其序列選自SEQ?ID?NO.1?3。本申請的肽能夠有效抑制α?葡萄糖苷酶，且安全無毒無副作用，因此作為功能成分用于食品、保健品以及降糖藥品中，具有良好的潛力和應用前景。

技術領域

本申請屬于蛋白領域，具體地，本申請提供了具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽及其應用和篩選方法。

背景技術

糖尿病是一種以胰島素激素功能障礙導致的高血糖為特征的代謝性疾病，近年來其患病率呈現快速增長的趨勢。其中，2型糖尿病(非胰島素依賴型)在成人中最為常見，約占所有糖尿病的90％。因此血糖水平的控制對糖尿病患者至關重要；餐后血糖較高可能會增2型糖尿病患病率，進而引發一系列的并發癥，如心血管疾病、腎病等。此外，高血糖還會增加活性氧的產生，導致氧化性組織損傷。血糖的主要來源是食物中的碳水化合物，其經過α-葡萄糖苷酶催化水解，生成單糖被吸收。催化水解碳水化合物的α-葡萄糖苷酶主要分布于小腸黏膜刷狀緣上。因此，α-葡萄糖苷酶是調控餐后血糖藥物的作用靶酶。阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖是目前較多使用的降糖藥物，其能夠通過競爭性地與α-葡萄糖苷酶結合,抑制該酶的活性,從而減慢糖類水解為葡萄糖的速度,同時減緩小腸對葡萄糖等碳水化合物的消化吸收,達到降低餐后血糖的作用。然而據報道，阿卡波糖和其類似藥物會產生一些不良副作用，例如脹氣、腹瀉、腹部和肝臟疾病。因此，尋找新的具有輕微或沒有不良影響的α-葡萄糖苷酶抑制劑對于糖尿病治療非常重要。

近年來，食物蛋白質作為功能肽的主要來源被廣泛研究。許多食源性肽已被證明具有抗菌特性、降血壓作用、降低膽固醇、抗血栓形成和抗氧化活性等。小米中的醇溶蛋白能夠發揮較好的降糖功效。目前已從小米蛋白中分離出了抗氧化、抗炎以及脂肪酶抑制肽，尚未有關于小米蛋白降糖肽的相關研究。小米醇溶蛋白在通過灌胃被給予糖尿病小鼠后，經過胃腸道消化被水解為氨基酸和肽，進入血液循環發揮包括降糖等生理作用。因此，小米醇溶蛋白水解得到的小分子肽可以作為潛在的功能性降糖物質。

發明內容

針對以上問題，一方面，本申請提供抑具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的小米醇溶蛋白肽，其特征在于，所述肽的序列選自SEQ?ID?NO.1-3。

進一步地，所述肽的序列為SEQ?ID?NO.1或SEQ?ID?NO.2。

另一方面，本申請提供了組合物，其特征在于，所述組合物包含上述肽以及藥學、食品或保健品上可接受的輔料。

另一方面，本申請提供了上述肽或者組合物在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑中的用途。

另一方面，本申請提供了上述肽或者組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應用。

另一方面，本申請提供了上述肽或者組合物在制備適用于糖尿病人群的降糖食品或保健品中的應用。

進一步地，所述糖尿病為2型糖尿病。

另一方面，本申請提供了篩選上述肽的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)體外模擬消化：使用酶法對熟小米醇溶蛋白進行水解以得到蛋白水解物；

(2)篩選：對蛋白水解物進行超濾處理；通過質譜得到超濾級分中置信度較高的肽段序列；采用殷賦云平臺對得到的肽段序列進行虛擬篩選，根據肽段的格點打分以及內部排斥能；篩選得到分別與α-葡萄糖苷酶對接效果較好的肽段；

(3)活性位點分析及體外功能預測：對篩選得到的肽序列進行水溶性、不穩定性、等電點、半衰期和ADMET性質的預測；使用殷賦云平臺對篩選得到的肽序列與α-葡萄糖苷酶進行對接，確定其與α-葡萄糖苷酶作用的關鍵氨基酸及相互作用力。

進一步地，所述水解使用胃蛋白酶和胰酶。

進一步地，所述超濾級分為＜3kDa的級分。