[發明專利]一種基于優化NA序列的廣譜流感疫苗及其應用

在審

• 申請號: 202210393105.2
• 申請日: 2022-04-15
• 公開（公告）號: CN114854777A
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 孫彩軍;韓子蓉;劉星來;李瑞婷
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/56
• 分類號: C12N15/56;C12N15/86;C12N15/62;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 薛建強

本發明公開了一種基于優化NA序列的廣譜流感疫苗及其應用，所述優化NA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。發明人通過將自噬關鍵基因LC3b與優化NA序列融合從而介導增強CD4⁺T細胞應答，并通過添加元件構建NA四聚體和VSV載體，得到了一種可以誘發更具交叉保護作用的廣譜流感疫苗。且發明人通過試驗驗證了本發明中的廣譜流感疫苗在小鼠中的免疫原性，還通過攻毒實驗評價了其保護效果，為研發高效廣譜的流感疫苗奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種基于優化NA序列的廣譜流感疫苗及其應用。

背景技術

季節性流感病毒對全球公共衛生安全構成巨大威脅，尤其在嬰幼兒和老年人等高危人群中可以導致重大的發病率和死亡率。據估計，在全球范圍內，流感流行每年造成約300萬至500萬嚴重病例，約29萬至65萬例與呼吸道疾病相關的死亡。目前，有多種抗病毒藥物用于治療人類季節性流感，但耐藥性日趨嚴重。接種疫苗目前被認為是預防流感病毒感染、致病、傳播的最有效的方法。流感疫苗可有效降低接種者的感染機會和減輕流感癥狀，是預防流感發生與傳播的重要手段。至今，流感疫苗的接種歷史已有60余年。現已批準上市的流感疫苗包括三價滅活流感疫苗、四價滅活流感疫苗以及一種鼻噴三價減毒活流感疫苗。然而，據世界衛生組織對流感疫苗保護效果的研究顯示，其平均保護率僅為39.9％，在部分年份甚至低于20％，提示當前流感疫苗總體保護效果較差。因此，研發新型廣譜流感疫苗具有重要的公共衛生意義。

流感病毒的主要表面抗原包括三聚體血凝素(Hemagglutinin，HA)蛋白和四聚體神經氨酸酶(Neuraminidase，NA)蛋白，二者均可引起機體產生強烈的體液免疫反應。流感病毒序列高度變異性，讓通用流感疫苗研發極具挑戰。例如，甲型流感病毒已被發現具有18種HA亞型和11種NA亞型。HA糖蛋白是中和抗體的主要靶點，它介導宿主細胞膜的附著和融合，常被用于研發流感疫苗的靶標。然而，在抗原漂移變異的過程中，針對HA受體結合域的抗原表位經常發生突變，使得現有流感疫苗的有效性每年會有所不同。除HA外，流感疫苗的效力可能還受流感病毒其他抗原影響。因此，研發針對不同病毒株有交叉保護的新型流感疫苗成為迫切需要解決的重大科學問題。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種基于優化NA序列的廣譜流感疫苗及其應用。發明人以優化后的流感病毒NA序列為核心，通過將自噬關鍵基因LC3b與其進行融合從而介導增強CD4⁺T細胞應答，并進一步添加元件構建NA四聚體，構建得到重組水皰性口炎病毒(rVSV)載體NA疫苗，為新型廣譜流感疫苗的研開發提供新思路，為流感病毒的防控新策略研究提供參考。

本發明的第一個方面，提供一種流感病毒神經氨酸酶的優化核酸分子。

根據本發明的第一個方面，在本發明的一些實施方式中，所述優化核酸分子的核苷酸序列為：

(1)如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；或

(2)將SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列經過一個或幾個修飾性堿基序列的取代和/或缺失和/或添加得到的與(1)中所述核苷酸序列翻譯得到的氨基酸序列一致的核苷酸序列。

在本發明的一些優選實施方式中，上述SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列是發明人以甲型流感病毒H1N1和甲型流感病毒H3N2的NA蛋白基因作為研究對象，并按照哺乳動物細胞的密碼子使用偏好性以及發明人的密碼子優化經驗，將基因序列進行優化得到的，且該序列中已被去掉了C端終止密碼子(-TAA)。