[發明專利]促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子及miRNA拮抗劑和應用

在審

• 申請號: 202210392910.3
• 申請日: 2022-04-14
• 公開（公告）號: CN114774417A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 曹建平;王伊洛;鞏文詞;胡媛;沈玉娟;周浩
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所（國家熱帶病研究中心）
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P33/12;A61P1/16
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 余艷

本發明公開了促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子及miRNA拮抗劑和應用。該促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子為novel miRNA?30、novel miRNA?33、novel miRNA?68、novel miRNA?30mimic、novel miRNA?33mimic、novel miRNA?68mimic、novel miRNA?30agomir、novel miRNA?33agomir或novel miRNA?68agomir。該抑制日本血吸蟲miRNA的拮抗劑是novel miRNA?30antagomir、novel miRNA?33antagomir或novel miRNA?68antagomir。本發明的miRNA拮抗劑具有成為治療日本血吸蟲病藥物有效成分的巨大潛力。

技術領域

本發明涉及寄生蟲分子生物學領域，尤其涉及促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子及miRNA拮抗劑和應用。

背景技術

日本血吸蟲引起的血吸蟲病在中國曾是一個嚴重的公共衛生問題。肝臟肉芽腫和肝纖維化是日本血吸蟲病的主要病理特征。寄生在宿主肝臟的日本血吸蟲蟲卵會被免疫細胞浸潤并包圍形成肉芽腫，其中日本血吸蟲蟲卵會釋放一系列的外泌體來調控其生存環境，并且可借外泌體來對宿主的免疫實現“逃避”以達到生存的目的，但是，日本血吸蟲蟲卵源性外泌體在肝纖維化中的作用和機制尚不清楚。

研究發現，過度積累且無法及時被降解的細胞外基質(Extracellular matrix，ECM)在肝纖維化進程中起著主導作用，而Ⅰ型膠原是宿主肝細胞間隙過度累積的ECM主要成分；從而使得細胞外基質過度的轉錄和分泌，進而造成宿主的肝臟纖維化，從而分泌一系列促進宿主自身發生肝臟纖維化的因子，如：EGF、TGF-β等，而肝星狀細胞的增殖活化與轉分化，則會打破宿主肝臟原有的ECM合成與降解平衡，從而導致ECM的過量累積不能被及時的消化，進而使得肝臟原有的生理平衡狀態被打破，導致纖維化的發生。日本血吸蟲卵中的可溶性抗原可以抑制HSC活化，誘導活化HSC衰老并促進HSC凋亡，從而控制肝纖維化的進展。然而，詳細的分子機制仍不清楚。外泌體，亦有稱細胞外囊泡(EV)的，它含有量大且復雜的生物學分子，例如：蛋白質、脂質和核酸等，用于長距離信息交換。各種寄生蟲分泌的EV已成為宿主與寄生蟲交流的重要途徑。研究表明，寄生蟲的EV可以包裝特定的miRNA，并且寄生蟲EV將miRNA轉移到宿主并提供寄生蟲與宿主之間的串擾。

微小RNA(microRNA，miRNA)，在生物學上通常是由十八至二十四個核糖核苷酸組成的小單鏈RNA分子。近年來，隨著對血吸蟲外泌體miRNA的深入研究，不僅為宿主肝臟纖維化的診斷，也為血吸蟲病的防治提供了依據。在肝纖維化的不同時期，來自蟲源和宿主源的miRNA通過各種方式來調控肝纖維化的進程，或通過與靶mRNA的特異性結合，從而增強靶mRNA的穩定性來促進宿主肝纖維化的進程，或是與靶mRNA互補配對降解靶基因的，抑制靶mRNA的生物學功能來抑制或者減輕宿主肝纖維化進程。

發明內容

如果找到了影響宿主肝纖維化的關鍵或較關鍵miRNA，合成相應的miRNA拮抗劑(miRNAantagomir)，則可能有利于治療和緩解日本血吸蟲帶來的宿主肝纖維化。本發明從這個目的出發，公開了一種促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子。所述促日本血吸蟲肝臟纖維化的miRNA分子為novel miRNA-30、novel miRNA-33、novel miRNA-68、novel miRNA-30mimic、novel miRNA-33mimic、novel miRNA-68mimic、novel miRNA-30agomir、novelmiRNA-33agomir或novel miRNA-68agomir；

novel miRNA-30、novel miRNA-33、novel miRNA-68為單鏈結構，其核苷酸序列分別為SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.8，或者分別為SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.8經過添加、缺失、修飾和/或保守性置換至少1個核苷酸獲得的核苷酸序列；