[發(fā)明專利]一種動(dòng)物微小組織石蠟切片的制作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210390080.0
• 申請(qǐng)日: 2022-04-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114689407B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王竹;陳潔;韓佳杞;胡靖睿;李穩(wěn);王程仕;賀濤;黃芹;楊清;鄭鴻;王艷萍;范羽;王宇;鎖嬌嬌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N1/28
• 分類號(hào): G01N1/28;G01N1/36;G01N1/30
• 代理公司: 四川力久律師事務(wù)所 51221
• 代理人: 陳明龍

1.一種動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、取材：正確識(shí)別動(dòng)物微小組織并快速、完整取材；

S2、固定：將動(dòng)物微小組織放入中性甲醛固定液中，固定24h-48h；固定完成后，進(jìn)行溢流沖洗；

所述溢流沖洗是指：取出動(dòng)物微小組織置于廣口瓶中，將瓶口罩紗布并用線系牢，用橡皮管將自來(lái)水引流至廣口瓶?jī)?nèi)，讓水自下而上的溢出，實(shí)現(xiàn)對(duì)于微小組織的沖洗作用；

S3、標(biāo)記及包裹：沖洗完成后，在微小組織表面使用伊紅染液進(jìn)行標(biāo)記；標(biāo)記后使用拭鏡紙進(jìn)行包裹，得到微小組織包裹；

S4、脫水透明：將微小組織包裹放入帶孔容器中，關(guān)閉帶孔容器蓋子；連同帶孔容器一起放入乙醇溶液中，進(jìn)行乙醇梯度脫水處理；

脫水處理完成后，連同所述帶孔容器一起放入二甲苯中進(jìn)行透明處理；透明處理完成后，取出所述微小組織包裹；

S5、石蠟包埋：在包埋模具中注入熔化的蠟液；用鑷子開(kāi)啟微小組織包裹，并取出其中的微小組織，將微小組織放入包埋模具中，然后將包埋模具加蓋，并繼續(xù)注入熔化的蠟液；待蠟液完全凝固后，去掉包埋模具，將蠟塊修邊切成四棱臺(tái)形狀；

S6、切片：將四棱臺(tái)形狀的蠟塊冷凍，然后將蠟塊放在切片機(jī)上固定牢固；連續(xù)切片，切片厚度控制在3-4μm，直至將組織完全切下；

切片過(guò)程中，使用鈍化處理的刀片進(jìn)行切片；

所述鈍化處理的刀片是指：切過(guò)白蠟塊200-400μm厚后的刀片，每次切片10μm；或者切白蠟塊20次-40次的刀片；

S7、展片：切片完成后，將切片展入溫度為40℃的展片水槽中，待組織展平，將切片黏附于載玻片上，將切片連同載玻片在60-65℃條件下進(jìn)行烤片；

S8、染色：烤片完成后，進(jìn)行染色，即得動(dòng)物微小組織石蠟切片。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，所述微小組織是指長(zhǎng)徑小于5mm的動(dòng)物組織。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，溢流沖洗流量為0.1-2L/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，所述拭鏡紙預(yù)先剪裁成矩形，經(jīng)過(guò)折疊包裹所述微小組織。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，步驟S4中，乙醇梯度脫水處理是指：用65%-100%乙醇按照乙醇濃度逐漸升高的方式進(jìn)行脫水處理。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，步驟S5中，在包埋機(jī)操作臺(tái)的熱臺(tái)上，取出微小組織，用溫度60-65℃的熱鑷子將微小組織轉(zhuǎn)移到預(yù)先注入的蠟液上。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，將蠟塊冷凍方法如下：將四棱臺(tái)形狀的蠟塊放入-20℃±3℃的冰箱冷凍1-3min，或者將蠟塊放在-6℃±3℃的冷凍臺(tái)上冷凍1-5min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述動(dòng)物微小組織石蠟切片制作方法，其特征在于，切片過(guò)程中，切面與切片刀相切；切片刀角為5-10度。