[發明專利]石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法

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• 申請號: 202210386831.1
• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號: CN114949322A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 張曉東;沈雷;何軍;劉丹陽;王洋;王璐璐;李永濤;李鵬輝
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾醫學院
• 主分類號: A61L15/18
• 分類號: A61L15/18;A61L15/32;A61L15/26;A61L15/40;D04H1/728
• 代理公司: 齊齊哈爾鶴城專利代理有限公司 23207
• 代理人: 劉麗

1.石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于它按以下步驟實現：

一、制備GQDs溶液：將5-10g檸檬酸粉末放入微波爐，1000W功率下熱解80-90 min，得到深棕色液體，然后倒入10-20 ml的1mol/L NaOH溶液中，于4℃下攪拌30min，獲得GQDs溶液；

二、合成GQDs/CXCL-8納米水凝膠液：28℃下將100mmol-200mmol CXCL-8、8.717μmol-17.434mmol N,N二乙基丙烯酰胺、129.7μmol-259.4μmol N,N'-甲基雙丙烯酰胺和87.67μmol-175.34μmol過二硫酸銨溶解于5mL-10mL去離子水中，超聲處理器處理4-8h，然后轉移到含有環己烷的圓底燒瓶中并加入span80均勻化，獲得GQDs/CXCL-8納米水凝膠液；

三、純化及固態：磁力攪拌器連續攪拌上述GQDs/CXCL-8納米水凝膠液，加入50-100μLN,N,N',N'-四甲基乙二胺，于氮氣下聚合反應6-12h，所得沉淀產物經洗滌離心后置于透析袋中，然后在磁力攪拌器上常溫下透析3天，獲得純化的GQDs/CXCL-8納米水凝膠液，經真空冷凍干燥，獲得GQDs/CXCL-8納米水凝膠顆粒；

四、配置靜電紡絲溶液：將135.0-270.0mg聚已內酯和45.0-90.0mg膠原蛋白溶解于1ml六氟異丙醇中，于室溫下磁力攪拌2-4h，然后加入30-60μlTween80并磁力攪拌1-2h，再以的0.05-0.08mg/min速度加入2.0-3.0mg GQDs/CXCL-8納米水凝膠顆粒并磁力攪拌4-5h，然后超聲分散，獲得靜電紡絲溶液；

五、構建組織誘導性材料：上述靜電紡絲溶液置于27號針頭注射器中，以承載ADM的鋁箔紙作為接收載體，采用靜電紡絲機進行包裹ADM的GQDs/CXCL-8水凝膠-聚已內酯-膠原蛋白納米纖維生物材料的制備；

六、靜電紡絲、干燥、紫外交聯和滅菌：上述包裹ADM的GQDs/CXCL-8水凝膠-聚已內酯-膠原蛋白納米纖維生物材料，經真空冷凍干燥、紫外交聯和滅菌后，獲得石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料，完成所述的制備方法。

2.根據權利要求1所述的石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于步驟二中所述均勻化：室溫下10000rpm均勻化1h。

3.根據權利要求1所述的石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于步驟三中所述洗滌離心：采用環己烷洗滌并于12000 rpm離心30min，重復3次，所得離心產物分散在去離子水中，于12000rpm離心30min，重復3次。

4.根據權利要求1所述的石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于步驟四中所述超聲分散：90W功率下超聲30min。

5.根據權利要求1所述的脫細胞真皮基質的制備方法，其特征在于步驟五中所述ADM采用脫細胞兔真皮基質，其制備如下：取雄性新西蘭白兔，麻醉，剃毛后，切取雄性新西蘭白兔背部15-20cm圓形全層皮膚，37℃，1mol/L氯化鈉溶液震蕩孵育12h，去除表皮層，然后用0.125%胰酶，37℃震蕩孵育24h后，0.5%十二烷基硫酸鈉溶液在37℃震蕩孵育4h，真空冷凍干燥機干燥6-8h，鈷60滅菌，-80℃封裝。

6.根據權利要求1所述的石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于步驟五中所述靜電紡絲機：設置參數為正負極電壓21kv，接收距離15cm，噴絲孔徑0.41mm，轉速為2800r/min，紡絲速度0.5mL/h，溫度22.0±0.5℃，濕度42.4±0.5%。

7.根據權利要求1所述的石墨烯量子點鑷誘捕宿主細胞歸巢的組織誘導性納米纖維生物材料的制備方法，其特征在于步驟六中所述紫外交聯：于6KW紫外線下交聯2h；所述滅菌：采用25kGy鈷60輻照滅菌15~20min。