[發明專利]RFC4基因作為宮頸病變診斷標志物的應用

在審

• 申請號: 202210386086.0
• 申請日: 2022-04-13
• 公開（公告）號: CN114672566A
• 公開（公告）日: 2022-06-28
• 發明（設計）人: 李雙;馬丁;張兼偉;孟思露
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574
• 代理公司: 北京麥匯智云知識產權代理有限公司 11754
• 代理人: 吳云

本申請提出了RFC4基因作為宮頸病變診斷標志物的應用，涉及臨床醫學技術領域。本發明通過檢測宮頸病變組織中RFC4基因的表達水平，能夠判斷宮頸病變的程度。RFC4的免疫組化染色證明了其對高級別宮頸病變診斷的準確性高，且診斷效能優于傳統指標p16^INK4a和Ki?67。本發明提供了一種有效的子宮頸病變診斷的分子標志物，所述標志物檢測靈敏度高，特異性強，具有重要的臨床價值和推廣應用前景。

技術領域

本申請涉及臨床醫學技術領域，具體而言，涉及RFC4基因作為宮頸病變診斷標志物的應用。

背景技術

在世界范圍內，宮頸癌是女性中第二大常見腫瘤。全球每年宮頸癌新增病例約60萬，死亡人數約30萬。中國每年有超過13萬宮頸癌新發病例，面臨著嚴峻的子宮頸癌防治形勢。宮頸癌主要分為鱗癌和腺癌，其中鱗癌占75％-80％。高危型HPV的持續性感染會導致子宮頸鱗狀上皮內病變(SIL，既往稱為子宮頸上皮內瘤變，CIN)，繼而進展為宮頸鱗狀細胞癌(SCC)。

根據2014年WHO女性生殖器腫瘤分類建議，子宮頸鱗狀上皮內病變可以分為高級別(HSIL)和低級別(LSIL)。臨床實踐中，不同級別的宮頸病變患者采取不同的治療策略，因此宮頸病變準確的組織學分級對患者的臨床治療顯得尤為重要。由于不同宮頸病變存在一定的相似性，從而導致不同病理醫師基于形態學的病理診斷重復性較差。基于此，利用各種生物標志物來輔助臨床的鑒別診斷，區分真正有進展風險的人群，指導后續的治療尤為必要。

目前臨床上常用p16^INK4a、Ki-67這兩個免疫組化標記物來輔助診斷。其中，p16^INK4a免疫組化染色能幫助鑒別反應性、不成熟化生或萎縮性鱗狀上皮與高級別子宮頸鱗狀上皮內病變(HSIL)，能夠提高HSIL診斷的準確性及觀察者之間的重復性。然而，p16^INK4a在正常宮頸、炎癥組織等中也存在一定的陽性率，使得其診斷特異性不高，容易造成病人的誤診和過度治療。因此，尋找敏感性和特異性高的宮頸病變診斷標志物，能夠及早發現有可能進展為子宮頸浸潤癌的HSIL，并及時予以治療，減少子宮頸浸潤癌發生的可能性。

發明內容

為解決現有技術上存在的不足，本申請的目的在于提供一種女性宮頸病變組織學診斷的分子標志物，即通過檢測RFC4基因在宮頸病變組織中的表達水平，從而評價宮頸病變程度，為宮頸病變的組織學診斷提供新的手段。

本申請解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

本申請通過搜索美國國家生物技術信息中心GEO數據庫，篩選出4個表達數據集，其中GSE63514、GSE27678和GSE7803作為發現集。我們采用了多步驟的生物信息學方法，在發現集中分別找到32、19和17個關鍵基因。進一步篩選至少兩個數據集共有的基因作為最終關鍵基因，得到了4個基因，分別為RFC4、CEP55、AURKA和TOP2A。收集正常、CIN1-3和宮頸鱗癌組織，利用免疫組化技術，驗證了關鍵基因蛋白表達量和宮頸病變程度呈正相關。同時，與目前臨床使用的p16^INK4a和Ki-67比較，發現RFC4對于診斷宮頸高級別鱗狀上皮內病變(HSIL)/宮頸高級別鱗狀上皮內病變和宮頸鱗癌(HSIL+)的效果好。

本申請提供了RFC4基因以及檢測其表達試劑在制備輔助診斷子宮頸高級別病變的產品中的應用。

進一步地，上述試劑包括檢測RFC4基因mRNA表達量或蛋白表達量的試劑；

可選地，上述試劑包括通過免疫印跡，實時定量PCR、原位雜交，基因或蛋白芯片，高通量測序，免疫組化等常用檢測方法檢測RFC4表達量所需要的試劑；

優選地，上述試劑為通過免疫組化檢測RFC4基因蛋白表達水平的所需試劑，包括與RFC4蛋白特異結合的抗體等。

本申請還提供了通過RFC4免疫組化來輔助診斷子宮頸高級別病變診的判斷標準。