[發(fā)明專利]前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物及其篩選方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210379577.2
• 申請日: 2022-04-12
• 公開（公告）號: CN114660304A
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王海峰;陳志超;黃應(yīng)龍;付什;欒婷;李義
• 申請（專利權(quán)）人: 王海峰;北京中科健蘭集團(tuán)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N1/28;C08F251/00;C08F220/56
• 代理公司: 合肥錦輝利標(biāo)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34210
• 代理人: 王利利

1.前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物，其特征在于：由血液經(jīng)高豐度蛋白去除處理后，用沉降劑純化，再進(jìn)行熒光染色與雙向凝膠電泳得到；

所述的沉降劑由如下步驟制成：

步驟A1：將殼聚糖、異丙醇、氫氧化鈉、去離子水混合攪拌后，加入一氯乙酸，繼續(xù)反應(yīng)，加入乙醇水溶液終止反應(yīng)，并調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH值，過濾去除濾液，將濾餅用乙醇溶液洗滌，再將濾餅溶于去離子水中，加入鹽酸至產(chǎn)生白色絮狀沉淀，將沉淀物洗滌并烘干，制得羧甲基殼聚糖；

步驟A2：將正硅酸乙酯、去離子水、鹽酸混合攪拌后，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷，繼續(xù)反應(yīng)，過濾去除濾液，將濾餅分散在去離子水中，加入羧甲基殼聚糖和1-羥基苯并三唑，回流反應(yīng)，制得改性殼聚糖；

步驟A3：將氯化鋁、氯化鐵、去離子水混合攪拌并入氫氧化鈉溶液，升溫繼續(xù)攪拌后，降溫保溫，加入改性殼聚糖，超聲處理，制得復(fù)合殼聚糖；

步驟A4：將復(fù)合殼聚糖加入淀粉液中，進(jìn)行攪拌并通入氮?dú)獬酰尤氡０泛吞妓岫柞ィ旌暇鶆蚝螅尤脒^硫酸鉀溶液，進(jìn)行反應(yīng)后，加入乙醇至沉淀析出，將沉淀干燥，制得沉降劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物，其特征在于：步驟A1所述的殼聚糖、異丙醇、氫氧化鈉、去離子水、一氯乙酸的用量比為1g:12mL:4.5g:25mL:25mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物，其特征在于：步驟A2所述的正硅酸乙酯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、羧甲基殼聚糖的用量比為0.1mol:0.06mol:10g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物，其特征在于：步驟A3所述的氯化鋁、氯化鐵、氫氧化鈉溶液、改性殼聚糖的用量比為9g:1g:20mL:6g。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物，其特征在于：步驟A4所述的復(fù)合殼聚糖、淀粉液、丙烯酰胺、碳酸二甲酯的用量質(zhì)量比為2:3:9:2，過硫酸鉀的用量為丙烯酰胺用量的0.5％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物的篩選方法，其特征在于：具體包括如下步驟：

步驟S1：將藍(lán)色medium介質(zhì)搖勻，進(jìn)行離心，去除上清，將底物加入平衡液，繼續(xù)離心，去除上清，將底物加入平衡液，繼續(xù)離心，去除上清，將底物和血漿混合均勻，孵育后，離心，將上清液繼續(xù)孵育，再次進(jìn)離心，取上清保溫得到第一樣品，將底物加入平衡液中，再次離心，取上清保溫得到第二樣品，將第一樣品和第二樣品混合，得到蛋白樣品；

步驟S2：將蛋白樣品和沉降劑混合均勻，冰水浴中保溫后，離心，去除上清，將底物分散在去離子水中，加入裂解液，保溫，再離心，去除上清，將底物、尿素、硫脲、三羥甲基氨基甲烷、CHAPS混合重溶后，進(jìn)行離心，取上清凍存，得到凍干樣本；

步驟S3：將凍干樣本進(jìn)行熒光染色，并在避光條件下進(jìn)行雙向凝膠電泳，得到前列腺癌代謝組學(xué)標(biāo)志物。