[發明專利]一種育苗生產中裙帶菜幼體發育過程的精準觀察方法

在審

• 申請號: 202210377940.7
• 申請日: 2022-04-12
• 公開（公告）號: CN114813516A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 劉劍波;張喜昌;冷曉飛;孫穎;張艷;許淑芬
• 申請（專利權）人: 大連海寶漁業有限公司
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N21/84
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 尚久恒

本發明公開了一種育苗生產中裙帶菜幼體發育過程的精準觀察方法，包括以下步驟：取育苗生產中的裙帶菜游孢子液，用消毒海水稀釋搖勻，5min中內注入蓋有蓋玻片的血球計數板的計數池中；在計數池中游孢子發育為胚孢子后，顯微鏡觀察胚孢子，用計數池大方格中的網格給胚孢子定位并進行編號；取下蓋玻片，將血球計數板懸吊于與血球計數板上胚孢子同一批次的裙帶菜幼體的池水中，每天觀察血球計數板上標記的裙帶菜幼體的生長發育狀態和發育階段，并據此進行生產管理。本發明可持續精準跟蹤觀察數個裙帶菜胚孢子的發育和生長情況，并據此對育苗池中的裙帶菜幼體精準管理。

技術領域

本發明涉及裙帶菜養殖技術領域，具體涉及一種育苗生產中裙帶菜幼體發育過程的精準觀察方法。

背景技術

裙帶菜(Undaria pinnatifida W.F.R Suringar,1873)，又稱和布、若布，屬褐藻門(Phaeophyta)、褐藻綱(Phaeophyceae)、海帶目(Laminariales)、翅藻科(Alariaceae)、裙帶菜屬(Undaria)藻類。裙帶菜被民間稱譽為長壽菜，營養豐富，經濟價值高，同時裙帶菜栽培對維護近海海域生態健康具有關鍵作用。裙帶菜是我國三大養殖經濟海藻之一，養殖年產量約20萬噸干品。目前裙帶菜種苗培育方法為全人工育苗。育苗生產中，裙帶菜繁殖器官孢子囊在育苗池中釋放游孢子。用顯微鏡檢測育苗池海水中游孢子密度，100倍鏡下每視野達到100個～200個游孢子時，將裙帶菜孢子囊網袋取出，隨即將苗種簾平鋪于池水中，同時將載玻片懸吊于池水中。100倍顯微鏡下，載玻片上胚孢子密度達到60-120個/視野時，將苗種簾移到其它育苗池中，進入育苗管理。

育苗管理過程中，每天剪取苗簾繩小段，顯微鏡或解剖鏡下觀察胚孢子或胚孢子發育成的配子體或幼孢子體的狀態，并據此進行育苗管理，包括光照強度、營養鹽使用量、流水量調節等。但顯微鏡下觀察苗簾繩上的裙帶菜幼體時，由于苗簾繩不透明且表面粗糙不平，處于胚孢子或配子體期的裙帶菜幼體附著在苗簾繩上，難以清晰觀察，只能對裙帶菜幼體的發育情況粗略判斷；而解剖鏡放大倍數不夠，只適合觀察發育到幼孢子體期個體較大的裙帶菜幼體，不適合觀察前期幼體的狀態和發育程度。同時，每天觀察后的苗簾繩都廢棄掉，次日剪取新苗簾繩觀察，因此每天觀察的都是不同的胚孢子、配子體或幼孢子體。所以生產中難以對裙帶菜幼體胚孢子和配子體階段的發育情況準確把握。

準確觀察胚孢子逐步發育成配子體、繼而發育成卵囊或精囊、釋放生殖細胞的過程和達到某一發育節點的時間，對把控育苗管理過程、適時調整育苗光照和施肥等條件，保證育苗成功具有重要生產意義。因此，裙帶菜人工育苗生產中急需精準觀察幼體發育過程的方法。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種育苗生產中裙帶菜幼體發育過程的精準觀察方法。本發明通過將游孢子液添加到蓋有載玻片的血球計數板中，使有限個游孢子進入計數池中發育為胚孢子，利用血球計數板、計數池及計數池內大方格的網格對胚孢子定位并進行編號后，將血球計數板懸吊于育苗池中，可用顯微鏡持續準確觀察編號的胚孢子的生長發育情況。根據胚孢子的生長發育情況確定育苗生產的光照、營養鹽、流水等條件。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種育苗生產中裙帶菜幼體發育過程的精準觀察方法，包括以下步驟：

(1)取育苗生產中的裙帶菜游孢子液，用消毒海水稀釋搖勻，5min中內注入蓋有蓋玻片的血球計數板的計數池中；

(2)在計數池中游孢子發育為胚孢子后，顯微鏡觀察，用血球計數板號、計數池號及計數池內大方格的網格位置給胚孢子定位并進行編號；取下蓋玻片，將血球計數板懸吊于與血球計數板上胚孢子同一批次的裙帶菜幼體的池水中，每天觀察血球計數板上標記的裙帶菜幼體的發育狀態和發育階段，并據此進行生產管理。

本發明所用血球計數板購自上海市求精生化試劑儀器有限公司，型號規格為XB-K-25，0.10mm，1/400mm²。